【正文】 ccCSA i02102121??? ??3021/:cmmgmVu n i tmAFccSC ?sgmVu n i tmAccSm /:2160? ? 最小檢出量 ? 響應(yīng)時(shí)間 ? 線性范圍 ? 噪音及檢處出限 SNcYQmmh22/0 ?????SNcFYQCCh202/0 ??????hYA h ??? 2/? Nch C31??注意： ?167。 ? 實(shí)驗(yàn)中要用雙柱、或多柱進(jìn)行分析，必 ? 須要有適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 ? 由于 I 的值溫度之間呈線性關(guān)系，所以可以方便的外推求出文獻(xiàn)測(cè)定條件下的 I 值而進(jìn)行定性分析，無(wú)須標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 27 氣相色譜定量法 ? 一、色譜定量公式： mi = fi′? Ai mi ：待測(cè)物質(zhì)質(zhì)量 fi ′ ：待測(cè)物質(zhì)定量校正因子 Ai ：待測(cè)物質(zhì)色譜峰的積分面積 ? 二、色譜峰的面積求法： ? 峰高乘半峰寬法 ? 峰高乘平均峰寬法 ? 峰高乘保留值法 ? 電子積分法 0 103hY1/2SignalthYA h ??? 2/2) YYhA ??? （tbhYhA Rh ????? 2/ ? 三、定量校正因子 ? （ Quantitative calibration factor） ? 絕對(duì)校正因子： ? 相對(duì)校正因子：用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為參照物、求出待測(cè)物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物之間絕對(duì)校正因子的比值。 ? i39。i Amf ?（ Mass calibration factor fm ） ? siis39。)m(immAmAfff ?? 校正因子（ Molar calibration factor fM ） 各物質(zhì)的量以摩爾數(shù)計(jì)， Mi , Ms分別表示被測(cè) 物與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量（摩爾質(zhì)量） ismisisis39。)M(iM MMfMmAMmAfff ??? ? 四、定量計(jì)算方法 ? 歸一化法：若樣品中所有的組分均能流出色譜柱且有較好的、可分辨的色譜峰時(shí)可用此法定量。 ? 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法：若樣品用量與加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量完全固定，則內(nèi)標(biāo)法的計(jì)算就可以簡(jiǎn)化為內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法，它適用于工廠內(nèi)成批樣品的定量分析。此時(shí)用欲測(cè)組分的純物質(zhì)加稀釋劑 (對(duì)液體樣品用溶劑稀釋、氣體樣品用載氣或空氣稀釋 )配成不同含量 (％ )標(biāo)準(zhǔn)溶液， 取固定量標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析 ，從所得色譜圖上測(cè)出響應(yīng)訊號(hào) (峰面積或峰高等 )、然后繪制響應(yīng)信汛號(hào)(縱坐標(biāo) )對(duì)百分含量 (橫坐標(biāo)）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 Signal wi Ai wi ?167。 ? 三、儀器特點(diǎn)： ? 分流器和尾吹氣裝置 毛細(xì)管柱 ? ?167。 Exam ? p59~p60 ?作業(yè)： 1 2 ? 2 2 2 32。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué) 鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測(cè)器等新實(shí) 驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。 21 高效液相色譜法的特點(diǎn) 一 、 HPLC與 GC差別 1． 分析對(duì)象的區(qū)別 GC：適于能氣化 、 熱穩(wěn)定性好 、 且沸點(diǎn)較 低的樣品；但對(duì)高沸點(diǎn) 、 揮發(fā)性差 、 熱穩(wěn)定性差 、 離子型及高聚物的樣 品 ， 尤其對(duì)大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè) 占有機(jī)物的 20% HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品 （ 包括 有機(jī)介質(zhì)溶液 ） ， 不受樣品揮發(fā)性和 熱穩(wěn)定性的限制 ， 對(duì)分子量大 、 難 氣化 、 熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分 子和離子型樣品均可檢測(cè) 用途廣泛 ， 占有機(jī)物的 80% 2． 流動(dòng)相差別的區(qū)別 GC：流動(dòng)相為惰性 ， 氣體組分與流動(dòng)相無(wú)親合作用 力 ， 只與固定相有相互作用 。 且流動(dòng)相種類較多 ， 選擇余地廣 ， 改 變流動(dòng)相極性和 pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用 ， 當(dāng) 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相 也可以增大分離選擇性 。 正相色譜分離有機(jī)溶劑中的物質(zhì) 反相色譜分離水溶液中的物質(zhì) 生化物質(zhì) 。 （ 蛋白質(zhì) 、 氨 基酸 、 常見(jiàn)陰陽(yáng)離子等 ） 利用多孔凝膠固定相建立空間排阻色譜法可分 離高分子化合物 。 167。239。ttk R?? 2)1( kknn e f f ??? 理（填充柱）： uCuBAHGC ???? /（毛細(xì)管柱）或 uCuBH ??? /dpA ?? ?2 dpA ?? ?gm DDB ???? ?? 22 gR DBtB ?? ，MTDTDgg ?? 或?llgsm CCCCCC ?????ll DdfC 2??TDL ?1. 二、速率理論（與 GC對(duì)比） 2）渦流擴(kuò)散項(xiàng)及其影響 （忽略縱向擴(kuò)散項(xiàng)后）： uCAHH P L C ???mDB ?? ?2??TDm ?相忽略大低，流動(dòng)相柱溫 BT ??? ??????????RtnHuuHscmu，但柱效，時(shí)，/1m i n/1 mlu ?? 選擇兼顧柱效和分析時(shí)間，2. ? 討論： 1）流動(dòng)相流速對(duì) HPLC板高的影響（與 GC對(duì)比） dpA ?? ?2 dpA ?? ?????????? 柱效， nHAdp?3）傳質(zhì)阻抗項(xiàng)及其影響 ）（忽略固定相傳質(zhì)阻抗smmssmm CCCCCC ?????忽略固定相傳質(zhì)阻抗態(tài)流動(dòng)相的傳質(zhì)阻抗注：只考慮流動(dòng)相和靜uCuCAHH P L C smm ?????? ：msmm DdpCC 2??mDdpC 2??TDm ????????? 柱效， nHCdp???????? 柱效， nHD m???????????，柱阻，但易產(chǎn)生氣泡?mmDTCDT1． 22114 kknR???????uCAH ???流動(dòng)相采用粘度小、低流速的勻的固定相：采用粒度小、填充均n39。39。12121212RRRRVVttkkKK ?????溫影響?。┵|(zhì)和固定相性質(zhì)（受柱：調(diào)整流動(dòng)相種類、性?039。 23 各類高效液相色譜法簡(jiǎn)介 1．分離機(jī)制：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附 活性中心能力的差異 分離前提： K不等或 k不等 )1(0mR VSKtt ???mVSKk ??一、液固吸附色譜法（ LSC） 流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑 2．固定相：與 LC比，固定相粒徑不同（ 10μm） （ 2） 高分子多孔小球： YSG 原理：吸附 +分配 蒹小孔凝膠作用 特點(diǎn)：柱選擇性好 ， 峰形好 ， 柱效低 適用：分離弱極性化合物 （ 1）硅膠 表孔硅膠（薄殼硅膠） 全多孔硅膠 無(wú)定形 YWG 5~6μm 5 104