從動(dòng)物肝組織中分離、提取、純化和鑒定一種酶-在線瀏覽
2025-02-22 23:22本頁(yè)面
【正文】 ： 一般微生物和植物的粗酶液中有大量的核酸污染。 三 .酶的提取 ：鹽析法 蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽后，由于中性鹽與水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，致使蛋白質(zhì)分子周圍的水化層減弱乃至消失。常作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。適當(dāng)提高溫度，可以提高酶的溶解度，也可以增大酶分子的擴(kuò)散速度，但是溫度過(guò)高，易引起酶的變性失活，所以提取時(shí)溫度不宜過(guò)高。當(dāng) pH值等于某酶的等電點(diǎn)時(shí)，酶分子的溶解度最小。但是過(guò)量的提取液，會(huì)使酶的濃度降低，對(duì)進(jìn)一步的分離純化不利。 鹽析法之后要進(jìn)行透析 四 .酶的分離 常用的酶分離方法有沉淀法、層析法、電泳法、離心法、過(guò)濾和膜分離法、萃取法等。在溶液的 pH值等于溶液中某兩性電解質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，該兩性電解質(zhì)分子的凈電荷為零，分子間的靜電斥力消除，使分子能聚集在一起而沉淀下來(lái)。 但由于蛋白質(zhì)在 pI點(diǎn)附件一定范圍的pH內(nèi)都可發(fā)生沉淀，只是沉淀的程度很不一樣，而且相當(dāng)多的蛋白質(zhì)的 pI點(diǎn)很靠近，所以該法的回收率和純化倍數(shù)都不理想，一般只用于酶的粗分離階段。可用柱層析法進(jìn)行進(jìn)一步的分離
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