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堿性磷酸酶的分離提取-在線瀏覽

2025-02-23 06:39本頁面
  

【正文】 4000 r/m 20 min,收集離心上清液,并量體積。 室溫離心, 4000 r/m 20 min,收集離心上清液,并量體積。緩慢加入,不斷攪拌溶解,置冰箱靜置 2 h。 沉淀 溶于 5 mL含 mol/L NaCl 的 mol/L TrisHCl pH 。 管 號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 pNP含量 (?mol) 0 ?mol/mL pNP (mL) 0 H2O (mL) Na2CO3NaHCO3 (mL) 各管加入 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL) 各管加入 mL mol/L NaOH (mL) 各管加入 mL OD 405 nm 以對(duì)硝基苯酚的絕對(duì)量 (?mol數(shù) )為橫坐標(biāo), OD405nm值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 ?= 103( mol/L)1﹒ cm1 管 號(hào) 空白 1 2 3 5 mM pNPP(mL) 各 Na2CO3NaHCO3 (mL) 各管加入 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL) 各管加入 mL H2O (mL) 各 混勻, 37℃ , 5分鐘 酶液( mL) / 各 37℃ ,精確反應(yīng) 10分鐘 mol/L NaOH (mL) 各管加入 mL 酶液( mL) OD 405 nm 酶活力的測定 以 0號(hào)管調(diào)零點(diǎn),測定各管的 OD405nm值,從對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出產(chǎn)物的 ?mol數(shù),算出酶活力。 2 2 39。 4 4 39。 加酶時(shí)間 ( min) 1m 2m m 3m 4m 5m 加 NaOH時(shí)間 11 12 13 14 15 反應(yīng)時(shí)間 ( min)
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