【正文】 上海亞榮生化儀器廠 SHZDⅢ循環(huán)水真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司 DS5510DT超聲波清洗器 上海生析超聲儀器有限公司 ZF7 三用紫外分析儀 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司 JY10002 電子天平 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司 Paratons Module 2695 高效液相 色譜儀 Waters 公司 機(jī)理 吸附柱層析是利用吸附劑對(duì)混合式樣各組分的吸附力不同而使各組分分離。 實(shí)驗(yàn)步驟 7 提取：取一定量乙醇水溶液與陳皮粉末，用乙醇提取橙皮中的物質(zhì)，再將乙醇溶液過濾，將得到的溶液用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸為稠狀物。 裝柱：取 g黃酮類化合物提取物溶于少量三氯甲烷。 洗脫：待該溶液完全流入石油醚后，依次用 400 mL 濃度為 35%， 55%， 75%，85%， 95%的乙酸乙酯石油醚（即料液比為 1:2）進(jìn)行洗脫，每 50 mL 裝一瓶， 從第一瓶開始編號(hào)，依次為 1,2,3,4,5直到 95%的洗脫液不再下滴。 稱取 3 份 15 g陳皮粉末， 150 mL 無水乙醇 (即料液比為 1： 10)，分別用索式提取法，加熱回流法，靜置提取法提取，分別對(duì)提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 30 mL 原濃度的乙醇水溶液洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。分別對(duì)提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 50 mL 原濃度的乙醇水溶液洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。分別對(duì)提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 100 mL 乙醇洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。分別取 A 溶液 5 mL， 10 mL， mL， mL 定容至 50 mL，50 mL， 50 mL， 25 mL，濃度即為 mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL，用 HPLC 進(jìn)行定量檢測(cè)，測(cè)定五組標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收峰面積的線性關(guān)系。由數(shù)據(jù)可知索氏提取法提取的量是最大的，可是考慮到實(shí)際情況 ，索氏提取法和加熱回流法都只能少量提取，但靜置提取法可以大批量的提取， 運(yùn)用于實(shí)際生產(chǎn)， 且索氏提取法和加熱回流法相對(duì)靜置提取法來說消耗的能源較多且存在安全隱患，再就是靜置提取法的產(chǎn)量相對(duì)前兩者差距不是太大，所以最終決定采用靜置提取法提取。 圖 2 乙 醇濃度對(duì)黃酮類化合物提取率的影響 of alcoholconcentration on flavonoid glycosides extraction rate 由圖可知 ， 20%與 40%提取液提取出的量差別不大，而 40%到 100%提取液的提取率變化較大，且依次遞增， 5 個(gè)實(shí)驗(yàn)組中提取出的質(zhì)量依次為 g， g， g， g， g，所以提取液濃度應(yīng)當(dāng)以 100%為最佳。 圖 3 提取時(shí)間對(duì)黃酮 類化合物提取率的影響 of extraction time on flavonoid glycosides extraction rate 由圖可 知， 在 5 個(gè)試驗(yàn)組中，浸提 5 d 提取率最大，為 g，此前 1 d 到 4 d的分別提取出是 g， g， g， g，總體變化趨勢(shì)不大。 將配制好的 mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL的川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)品做檢測(cè)，結(jié)果如表 1，圖 4. 表 1 川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果 Standard test results of the nobiletin 濃度 (mg/mL) 保留時(shí)間（ min） 峰高（ mAU） 峰面積（ mAU*min） 10 圖 4 川陳皮素標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線 Nobiletin standard working curve 由圖可以看出，川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液的曲線成線性關(guān)系，且經(jīng)計(jì)算得線性方程為Y=， Y 為峰面積， X 為川陳皮素濃度。 圖 5 洗脫劑洗脫之后 所得 樣品 After the eluent resulting sample 11 一共得到 37 組溶液，由洗脫過程中 得到的溶液的顏色 判斷 1,2,3 組為裝柱時(shí)留下的石油醚，所以不進(jìn)行后期的討論， 410 是濃度為 35%的洗脫劑洗脫所得溶液，1117 是濃度為 55%的洗脫劑洗脫所得溶液， 1824 時(shí)濃度為 75%的洗脫劑洗脫所得溶液， 2531 是濃度為 85%的洗脫劑洗脫所得溶液， 3237 是濃度為 95%的洗脫劑洗脫所得溶液。 HPLC 檢測(cè)結(jié)果中 ， 35%洗脫劑洗脫之后主要得到四種物質(zhì)， 取其中 8 號(hào)圖， 如圖 6. 0 . 0 5 . 0 1 0 . 0 1 5 . 0 2 0 . 0 2 5 . 0 3 0 . 01 0 . 00 . 01 2 . 52 5 . 03 7 . 55 0 . 07 0 . 0甲基黃酮 5 4 3 5 % 8 原液 U V _ V I S_ 1m A Um i n1 1 1 . 1 2 02 1 2 . 6 3 53 1 3 . 6 2 54 1 4 . 6 7 05 1 5 . 7 4 76 1 6 . 3 7 87 1 7 . 4 1 08 1 8 . 3 1 09 1 8 . 6 0 0W V L : 3 2 6 n m 序號(hào) 保留時(shí)間 峰名稱 峰高 峰面積 相對(duì)峰面積 樣品量 類型 min mAU mAU*min % 1 . . BMB 2 . . BMB 3 . . BMB 4 . . BMB 5 . . BMB 6 . . Rd 7 . . BM 8 . . M 9 . . MB 總和 : 圖 6 編號(hào) 35%8 號(hào)的檢測(cè)圖 results of %8 12 由圖譜可知 ，該組分中保留時(shí)間在 13 min 以后的化合物含量很高，說明 35％的洗脫液將極性小的物質(zhì)分離出來。 用 55%的洗脫劑洗脫之后主要得到兩種物質(zhì)，如圖 7. 0 . 0 5 . 0 1 0 . 0 1 5 . 0 2 0 . 0 2 5 . 0 3 0 . 05 0 005001 , 0 0 01 , 5 0 02 , 0 0 02 , 5 0 0甲基黃酮 6 7 5 5 % 1 5 無水乙醇 U V _ V I S_ 1m A Um i n1 5 . 3 9 72 6 . 2 7 73 6 . 7 8 04 6 . 8 7 85 8 . 1 8 86 8 . 2 1 07 9 . 3 5 28 1 0 . 0 4 79 1 1 . 2 0 31 0 5 、 6 、 7 、 8 、 3’ 、 4 ’ 1 1 . 4 8 31 1 1 2 . 6 7 01 2 1 3 . 6 7 51 3 1 5 . 7 9 0W V L : 3 2 6 n m 序號(hào) 保留時(shí)間 峰名稱 峰高 峰面積 相對(duì)峰面積 樣品量 類型 min mAU mAU*min % 1 . . BMB 2 . . BMB 3 . . BM 4 . . MB 5 . . BMB 6 . . Rd 7 . . BMB 8 . . BMB 9 . . BM 10 3’、 4’ M 11 . . M 12 . . MB 13 . . BMB 總和 圖 7 編號(hào) 55%15 號(hào)的檢測(cè)圖 results of %15 13 由圖可知 ，保留時(shí)間為 min 的物質(zhì)在 35%的洗脫液中也有出現(xiàn)，確定為橘皮素；保留時(shí)間為 min 的物質(zhì)是新洗脫下來的一種物質(zhì)，經(jīng)對(duì)比黃酮類化合物標(biāo)