biorad定量pcr說明書-在線瀏覽
2025-07-17 09:01本頁面
【正文】 Source Excitation Filter F Q Tubulin H Q GapdH TX Q bactin Cy5 Q Cyclophilin Multiplexing同時檢測 5色 熒光 Cycle Log Relative Fluorescence Texas Red FAM Hex Cy5 1010010001 4 710 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49T u b u l i nC y c l o p h i l i nb e t a A c t i nG A P D HMultiplexing 定量 PCR儀應(yīng)該具備的特點： 開放性的系統(tǒng) ?可兼容的定量方法： SYBR Green I、 Taqman探針、 Beacon探針、 FRET探針 ?可兼容的突變檢測方法： 熔點曲線功能、 MGB探針 ?可兼容的試劑種類： 所有國產(chǎn)與進(jìn)口試劑 iQ5 Data Analysis Software iQ5 Data Analysis Software 定量 PCR儀應(yīng)該具備的特點： 分析軟件功能強大簡潔直觀 點擊您所需要的程序名稱，該程序所包含的所有內(nèi)容都一目了然。 黃色提示會警告您在編輯的程序中存在邏輯錯誤的數(shù)據(jù)。 在運行開始之前，警示框提示數(shù)據(jù)設(shè)置的殘缺。 Green I – SYBR174。 ? PCR擴增信號進(jìn)入相對穩(wěn)定對數(shù)增長期時的熒光值。 ? 從圖中的重復(fù)實驗中可以直觀地看到，隨著 PCR反應(yīng)過程，熒光信號從基線經(jīng)一個轉(zhuǎn)折點進(jìn)入指數(shù)期、線性期和最終的平臺期，盡管平臺期 DNA拷貝數(shù)波動很大， CT值卻是相對固定的。 ? 模板起始濃度越高， Ct值越小 ? Ct值與模板起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系 Ct值與模板起始濃度的關(guān)系 ? 如果模板濃度增加 1倍， Ct值就提前 1個循環(huán)到達(dá) ? 如果模板濃度減少 1倍， Ct值就滯后 1個循環(huán)到達(dá) ? 1 CT Difference = 2 fold difference in starting template amount ? CT Difference = 10 fold difference in starting template amount ProductT=(Template0)2n Where n=Number of Cycles Mathematic Implications Ideal PCR C o p y N u m b e r v s . Ct S t a n d a r d C u r v ey = 3 . 3 1 9 2 x + 3 9 . 7 7 2R2 = 0 . 9 9 6 705101520253035400 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11L o g o f c o p y n u m b e r ( 1 0n)CtThreshold Cycle, Ct, is a reliable indicator of initial copy number 利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代表 Ct值。 Absolute and Relative quantification Quantification Normalization of RTPCR using reference genes Determines changes in steady state transcription of a gene or genes Expression of the gene/s of interest is normalized against a reference gene/s (housekeeping gene/s) with no or insignificant expression variation Examples of some reference genes/housekeeping genes used : bActin, GAPDH, 18s rRNA b2 Micro globulin, Cyclophilins ?BetaActin ?Ornithine decarboxylase (ODC) ?Sadenysyl methionine decarboxylase (SAMDC) Human Prostate and Thymus RealTime Multiplex PCR: Gene Expression Realtime Multiplex Gene Expression BetaActin ODC S
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