蛋白質(zhì)分離純化步驟-展示頁
2024-11-19 04:00本頁面
【正文】 質(zhì)。3. 有機溶劑沉淀法被鹽析沉淀下來的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì)，并能再度溶解而不變性。2. 鹽析法不同蛋白質(zhì)的等電點不同，可用等電點沉淀法使它們相互分離。常用的有下列幾種方法：選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來。在抽提過程中，應(yīng)注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。5. 酶法生物組織經(jīng)凍結(jié)后，細胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細胞脹破。3. 反復(fù)凍融法常用設(shè)備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。1. 機械破碎法常用的破碎組織細胞的方法有：分離提純某一種蛋白質(zhì)時，首先要把蛋白質(zhì)從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)，不喪失活性。分離純化蛋白質(zhì)的一般程序可分為以下幾個步驟：（一）材料的預(yù)處理及細胞破碎同時也應(yīng)避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。其次，應(yīng)設(shè)法避免蛋白質(zhì)變性，以制備有活性的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)提純的目的是增加產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量，同時又要保持和提高產(chǎn)品的生物活性。且分離的關(guān)鍵步驟、基本手段還是共同的。到目前為止，還沒有一套現(xiàn)成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來。大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起，而且每種類型的細胞都含有成千上萬種不同的蛋白質(zhì)。一、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則許多蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)上有許多相似之處，所以蛋白質(zhì)的分離提純是一項復(fù)雜的工作。但是對于任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。因此，要分離純化某一種蛋白質(zhì)，首先應(yīng)選擇一種含目的蛋白質(zhì)較豐富的材料。對于大多數(shù)蛋白質(zhì)來說，純化操作都是在0～4℃的低溫下進行的。另外，還要設(shè)法除去變性的蛋白質(zhì)和其它雜蛋白，從而達到增加純度和提高產(chǎn)量的目的。 二、分離純化蛋白質(zhì)的一般程序所以要采用適當?shù)姆椒▽⒔M織和細胞破碎。這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。2. 滲透破碎法這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。(二) 蛋白質(zhì)的抽提通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX100等），使膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋白質(zhì)與膜分離。(三）蛋白質(zhì)粗制品的獲得比較方便的
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