免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展-展示頁
2024-10-03 13:53本頁面
【正文】 該方法不能排除胞吞對胞吐檢測的影響,并且對試驗條件如封接電阻(Rm)、 串聯(lián)電阻(Rs)的要求很高, 對于一些較復(fù)雜結(jié)構(gòu)如神經(jīng)軸突終末、 與周邊細(xì)胞有電學(xué)偶聯(lián)的細(xì)胞等則不能用該技術(shù)進(jìn)行研究。這一方法為研究單個小囊泡的分泌活動如膜融合孔開閉動力學(xué)、膜融合事件的分子調(diào)控等提供了強(qiáng)有力的工具。46。這種技術(shù)對囊泡分泌的時間分辨率極高(～ms),常用來研究分泌事件與離子通道活動以及細(xì)胞內(nèi)第二信使的關(guān)系。1 膜電容測量 近10年來, 膜電容檢測技術(shù)在研究細(xì)胞胞吐和胞飲機(jī)制方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用［1］。 1amp。近年來,各種實時監(jiān)測技術(shù)的發(fā)展極大地促進(jìn)了人們對細(xì)胞分泌機(jī)制的了解。46。46。將膜電容測量、電化學(xué)測量、 光學(xué)測量、細(xì)胞內(nèi)信號分子光解等生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域, 可能為免疫細(xì)胞分泌的調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究提供大量有意義的數(shù)據(jù), 從而盡快填補(bǔ)該領(lǐng)域的研究空白。細(xì)胞分泌活動涉及一系列復(fù)雜的分子活動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 隨著新技術(shù)尤其是細(xì)胞分泌檢測技術(shù)的不斷出現(xiàn),這一過程正在被逐步揭示出來。有關(guān)免疫細(xì)胞中細(xì)胞因子的分泌機(jī)制研究的較少, 將膜電容測量、 電化學(xué)測量、光學(xué)測量、 胞內(nèi)信號分子光解等近年發(fā)展起來的生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域, 對研究免疫細(xì)胞的分泌調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)意義重大。摘要：細(xì)胞分泌活動涉及一系列復(fù)雜的分子活動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 它是許多重要生命活動如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、 內(nèi)分泌激素分泌、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等的基礎(chǔ)。故而有關(guān)細(xì)胞分泌活動的研究近年在國際上形成一個新的熱點(diǎn)。細(xì)胞分泌活動是生物體信息傳遞和細(xì)胞功能的基本過程之一, 如神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)和激素的分泌、免疫系統(tǒng)中細(xì)胞因子和抗體的分泌等。目前對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的研究已經(jīng)很深入,而對免疫細(xì)胞分泌活動尤其是細(xì)胞因子分泌的動力學(xué)和分泌調(diào)控機(jī)制的研究則相對較少。 1 單細(xì)胞分泌實時測量的新方法 細(xì)胞分泌活動的傳統(tǒng)研究方法主要采用ELISA、 RIA、 FACS等階段性定量測定或冰凍蝕刻電鏡技術(shù)、 普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)等形態(tài)學(xué)研究方法,都屬于非現(xiàn)場靜態(tài)研究, 并且是大量細(xì)胞共同3期婁雪林等: 免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展生理學(xué)報Acta Physiolamp。 Sinamp。54卷測定。下面就目前常用的三種細(xì)胞分泌實時檢測技術(shù)的原理、方法以及優(yōu)缺點(diǎn)作簡要介紹。46。細(xì)胞分泌的最后一步是囊泡膜與胞漿膜融合的過程,當(dāng)分泌發(fā)生時細(xì)胞膜的表面積會增加, 而細(xì)胞膜的電容大小正比于細(xì)胞膜的表面積(～1 μF/cm2),因此細(xì)胞膜電容的增加就代表細(xì)胞分泌量。最近出現(xiàn)的細(xì)胞貼附膜片電容技術(shù), 膜電容分辨率可達(dá)到0amp。1 fF, 能檢測到直徑60 nm的小囊泡分泌［2］。由于胞吐后囊泡膜的回收會導(dǎo)致膜電容的減少, 因此膜電容檢測技術(shù)也能提供囊泡胞飲過程的信息。 1amp。2 電化學(xué)測量 用電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測細(xì)胞分泌的原理是: 在電極尖端表面施加一定的電壓, 容易氧化的化學(xué)信使物質(zhì)就會在電極尖端釋放出電子而發(fā)生氧化,電極可獲得電子并產(chǎn)生一定的電流［3］。對單個分泌電流峰積分即可估算出每個囊泡中包含的遞質(zhì)分子數(shù), 即量子包裝的大小。在單細(xì)胞胞吐測量時兩種方法可以互相補(bǔ)充。 [!] 電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測分泌的最大優(yōu)點(diǎn)是時間分辨率高(ms級), 能監(jiān)測單個囊泡的釋放以及囊泡中 的遞質(zhì)含量, 且較膜電容測量更為直觀。 另外, 該方法對細(xì)胞無損傷, 可進(jìn)行長時間監(jiān)測。本方法常與膜電容方法聯(lián)合應(yīng)用來研究分泌事件, 以相互補(bǔ)充。46。FM143和FM464等是有效的研究分泌活動的選擇性膜表面熒光標(biāo)記物,它們在水相中沒有熒光, 當(dāng)它們插入脂質(zhì)膜后則顯示較強(qiáng)的熒光, 囊泡膜胞吐后會使細(xì)胞表面熒光增加, 而胞吞回收的囊泡因吞進(jìn)細(xì)胞周圍的染料而被熒光標(biāo)記,這樣便能夠?qū)崟r觀察細(xì)胞的胞吐及胞吞過程。另一種方法是通過基因轉(zhuǎn)染方法將熒光基因如綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞中并選擇性地在囊泡中表達(dá),然后用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡等檢測囊泡的運(yùn)動過程［5］。此外還有免疫熒光標(biāo)記法: 多巴胺β羥化酶(DBH)在嗜鉻細(xì)胞分泌囊泡中是一種主要的膜蛋白,由于它在胞吐中會出現(xiàn)在細(xì)胞膜的表面, 隨著
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