免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展-wenkub
2024-10-03 13 本頁(yè)面
【正文】 Ca2 親和力較低, 且不易被光解產(chǎn)生大的Ca2 階躍。這克服了單純電刺激引起的離子通道附近產(chǎn)生不同的鈣微區(qū)的缺點(diǎn)。46。另一種方法是通過基因轉(zhuǎn)染方法將熒光基因如綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞中并選擇性地在囊泡中表達(dá),然后用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡等檢測(cè)囊泡的運(yùn)動(dòng)過程［5］。46。 另外, 該方法對(duì)細(xì)胞無損傷, 可進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)測(cè)。在單細(xì)胞胞吐測(cè)量時(shí)兩種方法可以互相補(bǔ)充。2 電化學(xué)測(cè)量 用電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分泌的原理是: 在電極尖端表面施加一定的電壓, 容易氧化的化學(xué)信使物質(zhì)就會(huì)在電極尖端釋放出電子而發(fā)生氧化,電極可獲得電子并產(chǎn)生一定的電流［3］。由于胞吐后囊泡膜的回收會(huì)導(dǎo)致膜電容的減少, 因此膜電容檢測(cè)技術(shù)也能提供囊泡胞飲過程的信息。最近出現(xiàn)的細(xì)胞貼附膜片電容技術(shù), 膜電容分辨率可達(dá)到0amp。46。54卷測(cè)定。 1 單細(xì)胞分泌實(shí)時(shí)測(cè)量的新方法 細(xì)胞分泌活動(dòng)的傳統(tǒng)研究方法主要采用ELISA、 RIA、 FACS等階段性定量測(cè)定或冰凍蝕刻電鏡技術(shù)、 普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)等形態(tài)學(xué)研究方法,都屬于非現(xiàn)場(chǎng)靜態(tài)研究, 并且是大量細(xì)胞共同3期婁雪林等: 免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展生理學(xué)報(bào)Acta Physiolamp。細(xì)胞分泌活動(dòng)是生物體信息傳遞和細(xì)胞功能的基本過程之一, 如神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)和激素的分泌、免疫系統(tǒng)中細(xì)胞因子和抗體的分泌等。摘要：細(xì)胞分泌活動(dòng)涉及一系列復(fù)雜的分子活動(dòng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 它是許多重要生命活動(dòng)如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、 內(nèi)分泌激素分泌、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等的基礎(chǔ)。細(xì)胞分泌活動(dòng)涉及一系列復(fù)雜的分子活動(dòng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 隨著新技術(shù)尤其是細(xì)胞分泌檢測(cè)技術(shù)的不斷出現(xiàn),這一過程正在被逐步揭示出來。46。近年來,各種實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)技術(shù)的發(fā)展極大地促進(jìn)了人們對(duì)細(xì)胞分泌機(jī)制的了解。1 膜電容測(cè)量 近10年來, 膜電容檢測(cè)技術(shù)在研究細(xì)胞胞吐和胞飲機(jī)制方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用［1］。46。 膜電容測(cè)量技術(shù)可用于神經(jīng)細(xì)胞、 內(nèi)分泌細(xì)胞、 免疫細(xì)胞等大多數(shù)細(xì)胞的分泌測(cè)量, 而且測(cè)量精度和時(shí)間分辨率都較高, 但該方法不能排除胞吞對(duì)胞吐檢測(cè)的影響,并且對(duì)試驗(yàn)條件如封接電阻(Rm)、 串聯(lián)電阻(Rs)的要求很高, 對(duì)于一些較復(fù)雜結(jié)構(gòu)如神經(jīng)軸突終末、 與周邊細(xì)胞有電學(xué)偶聯(lián)的細(xì)胞等則不能用該技術(shù)進(jìn)行研究。微電極的電流大小與電極尖端面積和實(shí)驗(yàn)類型有關(guān), 一般在pA到nA范圍,通常采用膜片鉗放大器等低噪聲儀器進(jìn)行檢測(cè)。目前兒茶酚胺、 5HT、 胰島素、 組胺、 nO以及含色氨酸或酪氨酸殘基的多肽激素或遞質(zhì)都可直接或間接地使用該方法檢測(cè)［16］。但是電極只能檢測(cè)到少部分信息物質(zhì)(10％左右),而且對(duì)于那些不能被氧化的物質(zhì)的釋放不能直接檢測(cè)［16］。3 細(xì)胞分泌的光學(xué)測(cè)量 用普通光學(xué)顯微鏡只能檢測(cè)巨大囊泡的分泌過程,而新的熒光染料的開發(fā)和顯微成像技術(shù)的發(fā)展使實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)小囊泡的分泌成為可能［4］。例如, 將GFP基因與囊泡特異的前胰島素基因整合后轉(zhuǎn)入胰島INS1 β細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),然后用熒光成像技術(shù)實(shí)時(shí)研究活分泌囊泡的轉(zhuǎn)移、 錨定和胞吐過程。4胞內(nèi)信號(hào)分子光解方法 細(xì)胞分泌活動(dòng)受很多因素的調(diào)控, 采用信使物質(zhì)瞬時(shí)釋放的方法［6］,可以定量研究各因素對(duì)分泌的影響。DMnitrophen在光解前對(duì)Ca2 有很高的親和力,對(duì)靜息的細(xì)胞鈣緩沖幾乎沒有影響, 是研究細(xì)胞鈣緩沖和鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的非常理想的材料。除了Ca2 外, 許多第二信使如cAMP等都可用該方法對(duì)其細(xì)胞內(nèi)濃度進(jìn)行精確控制。離子通道的活動(dòng)與離子跨膜流動(dòng)、膜電位的變化以及隨后的淋巴細(xì)胞激活密切相關(guān)。 根據(jù)其電壓激活和滅活的動(dòng)力學(xué)特性以及藥理學(xué)特征可分為3種亞型, 它們隨細(xì)胞的發(fā)育狀態(tài)和功能分類不同而有所變化,可能與細(xì)胞有絲分裂有關(guān)。電壓依賴性Ca通道僅在B淋巴細(xì)胞上存在, 而在T淋巴細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞株均未見報(bào)道。單細(xì)胞上的鈣信號(hào)可表現(xiàn)為反復(fù)的鈣振蕩,這可能是一種通過頻率編碼來傳遞信息的方式。 2amp。當(dāng)分泌小泡與細(xì)胞膜溶合并胞吐時(shí), 便伴有膜電容的增加。進(jìn)一步研究Ca2 和GTPγS的促分泌效率的差別和他們分別在什么情況下起作用將是一個(gè)重要課題。
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