【正文】 規(guī)范 》 制訂本實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （ SSOP） ， 該制度或程序應(yīng)適用于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件 ， 并與實(shí)驗(yàn)室其它規(guī)定相一致 。 ? 2） HIV分離 、 研究 ? HIV分離 、 細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作應(yīng)在 Ⅲ 級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室 （ BSL3） 中進(jìn)行 。 ? 在 18月齡以前可以用多種不同的非抗體依賴性的檢驗(yàn)方法對(duì)新生兒 HIV感染進(jìn)行輔助診斷 ， 包括：HIV P24抗原檢測(cè) 、 病毒分離培養(yǎng) 、 RNA或 DNA測(cè)定 。 ? 嬰幼兒經(jīng)過胎盤或哺乳從母親獲得的 HIV抗體不能用于診斷是否經(jīng)母嬰傳播感染 HIV。 ? HIV1P24抗原檢測(cè)的敏感性為 30?90％ ， 低于病毒載量測(cè)定 。 ? 4） 結(jié)果報(bào)告和解釋 ? HIV1 P24抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗(yàn)確認(rèn) ，若陽性標(biāo)本的 OD值比中和反應(yīng)前減少 50%以上 ， 才確定為 HIV P24抗原結(jié)果陽性 。 ? 為了提高檢測(cè)血清中 P24抗原的敏感性 ， 需先將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測(cè)定 ， 目前已發(fā)展了 ICD P24抗原 （ immunplex disassociate，免疫復(fù)合物解離 ， ICD） 測(cè)定試劑 ， 用于 HIV1 P24抗原測(cè)定 。 ? 監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果 。 ? HIV1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷 。 3． HIV P24抗原的檢測(cè) 規(guī)定了 P24抗原的檢測(cè)方法 、 適用 范圍和 規(guī)范性引用文件 。 ? 省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室難以確認(rèn)的樣品 ，送國家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn) 。 將前后 2份樣品同時(shí)檢測(cè) ，仍呈不確定或陰性則報(bào)告 HIV抗體陰性 ， 如果在隨訪期間發(fā)生帶型進(jìn)展 ， 符合 HIV抗體陽性判定標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告 HIV1或 HIV2抗體陽性 。 ） ” ， 在備注中應(yīng)注明 “ 3個(gè)月后復(fù)檢 ” ，同時(shí)進(jìn)行以下處理： ? 1) 隨訪復(fù)檢：每 3個(gè)月隨訪復(fù)檢 1次 ， 連續(xù) 2次 ，共 6個(gè)月 。 也可進(jìn)行 HIV1 P24抗原或 HIV核酸檢測(cè) ， 作為輔助診斷 。 ? 符合 HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn) ， 報(bào)告 “ HIV抗體陰性（ ） ” 。 ） 。 ? 對(duì)篩查陰性和陽性者 ， 均需做好檢測(cè)后咨詢 。 ? 復(fù)檢試驗(yàn)：對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè) 。 ? 如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測(cè)或確認(rèn) ， 需要填寫“ HIV抗體復(fù)測(cè)送檢單 ” （ 附表 2） ， 經(jīng) 1名檢驗(yàn)人員和 1名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員審核簽字 。 ? ② 符合以下條件的實(shí)驗(yàn)成立： ? 兩個(gè)以上的 NC可用 （ ＜ ） 。 ? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? ① 陰性對(duì)照 （ NC） ， HIV1陽性對(duì)照 （ PC1） ，HIV2陽性對(duì)照 （ PC2） NC 必須＜ ， 排除 NC≥ ， 計(jì)算 NC平均值 。 ? 初篩試驗(yàn)：以第三代 ELISA（雙抗原夾心法）為例。 篩查陽性者仍需采血做確認(rèn)試驗(yàn)才能確定 。 ? 尿液 HIV抗體檢測(cè) 1996年美國 FDA首次批準(zhǔn) HIV1尿液 ELISA試劑 ， 我國也正在研制尿液 HIV抗體檢測(cè)試劑 。 以唾液為樣品測(cè)定 HIV抗體的 ELISA、 免疫印跡法 （ WB） 試劑美國 FDA已批準(zhǔn) 。 主要檢測(cè)唾液中的 HIV IgA與 IgG抗體 ， 敏感性特異性與 ELISA相近 ， 可避免靜脈穿刺 。 一般可在 10?30min內(nèi)判讀結(jié)果 。 試驗(yàn)時(shí)不需任何設(shè)備 ， 迅速 、 簡(jiǎn)便 、 特異性較好 ， 敏感性約相當(dāng)于中度敏感的 ELISA， 適用于應(yīng)急檢測(cè) 、 門診急診個(gè)體檢測(cè) 。 區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體 ， 而代之以紅色的膠體金（ 或膠體硒 ） A蛋白 ， 用滲濾 （ 或?qū)游?） 法作為洗滌方法 。 反應(yīng)時(shí)間在 10 min以內(nèi) ， 使用抗原量少 。 加血清樣品作用 ， 以后步驟同ELISA。 PA試劑有兩種 ， HIV1和 HIV2抗原共同致敏的PA試劑 （ AFD HIV1/2 PA） ， 已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局 （ SFDA） 注冊(cè)批準(zhǔn)； HIV HIV2抗原分別致敏的 PA試劑 （ SERODIAHIV1/2） 可初步區(qū)分 HIV1型和 HIV2型 ， 目前我國尚未引進(jìn) 。 常用的主要有以下幾種： ? ① 明膠顆粒凝集試驗(yàn) （ PA） ： PA是 HIV血清抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法 ， 是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體 ， 與待檢樣品作用 ，混勻后保溫 （ 一般為室溫 ） 。 ? 注意防止樣品間交叉污染 。 ? 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （ SOP） 。 ? 以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播 HIV而進(jìn)行的檢測(cè) ， 包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查 。 ? 以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群 HIV感染率及其變化趨勢(shì)而進(jìn)行的檢測(cè) ， 檢測(cè)的人群包括各類高危人群和一般人群 。 ? 應(yīng)符合 《 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求 》 （ GB 194892023） 對(duì) II級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（ BSL2） 的各項(xiàng)要求 。 并規(guī)定了規(guī)范性引用文件 。 2． HIV抗體的檢測(cè) ? （ 1） HIV抗體的檢測(cè)規(guī)定了 HIV抗體的檢測(cè)方法 、檢測(cè)程序 、 檢測(cè)報(bào)告及檢測(cè)策略；其 適用范圍為： 各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu) 、 疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu) 、 檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu) 、 采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu) 。 ? 如果污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受 ，則應(yīng)將樣品安全廢棄 。 樣品處理時(shí)若內(nèi)容物有可能濺出 ， 則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進(jìn)行 。 在第三層容器外面要貼標(biāo)簽 （ 數(shù)量 ， 收 、發(fā)件人 ） 。 將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi) ， 容器的材料要易于消毒處理 。 隨樣品應(yīng)附有送檢單 ， 送檢單應(yīng)與樣品分開放置 。 樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi) ， 試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記 ， 標(biāo)明樣品的編號(hào)或受檢者姓名 、 種類和采集時(shí)間 。 ? （ 3）樣品的保存 用于 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品不能長期保存，樣品采集時(shí)間超過 48h則不可檢測(cè)。 一、 對(duì)原有章節(jié)的修改和完善： ? ? （ 1）規(guī)定了樣品的采集和處理適用范圍： 用于 艾滋病病毒（ HIV）檢測(cè)的血清、血漿和全血樣品的采集和處理方法，適用于 HIV抗體檢測(cè)、抗原檢測(cè)、核酸檢測(cè)、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定和 HIV分離培養(yǎng)。 ? VCT(自愿咨詢檢測(cè) )和當(dāng)前防治工作的需求 ， 新增了以下內(nèi)容 : HIV抗體檢測(cè)的替代策略 ， 嬰幼兒 HIV感染診斷 ， HIV RNA定量測(cè)定 （ 病毒載量測(cè)定 ） ， CD4+/CD8+ T淋巴細(xì)胞檢測(cè) ， 職業(yè)暴露預(yù)防和補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)室意外事故緊急處理措施 。 《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》要點(diǎn) 中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)中心 聯(lián)系： 13103221307 一、 特點(diǎn)概述 ? 1． 《 全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 （ 2023年版 ）》是參考國際標(biāo)準(zhǔn) ISO/DIS 151892023 、ISO/DIS 151902023和 Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/ UNAIDS/ ISBN 9713920637對(duì) 〈 全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 (試行 )〉 進(jìn)行全面修訂而成 ， 與國際檢測(cè)技術(shù)和策略緊密接軌 。 ? ：樣品的采集和處理 ， HIV抗體的檢測(cè) （ 目的 、 要點(diǎn) 、 方法及結(jié)果報(bào)告 ） ,HIVP24抗原檢測(cè) （ 方法 、 結(jié)果報(bào)告和解釋 ） ， 艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等 。 ? ， 對(duì)每章內(nèi)容均標(biāo)明了“ 范圍 ” 和 “ 規(guī)范性引用文件 ” 。 ? （ 2）應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽喝鏑D4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定可選用 K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉， HIV病毒分離、核酸定性 /定量檢測(cè)可選用 K3EDTA或枸櫞酸鈉。 ? （ 4） 樣品的運(yùn)送 ? 應(yīng)采用 WHO提出的三級(jí)包裝系統(tǒng)： ? 第一層容器：裝樣品 ， 要求防滲漏 。 在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料 ， 以免碰碎 。 ? 第二層容器：要求耐受性好 、 防滲漏 、 容納并保護(hù)第一層容器 ， 可以裝若干個(gè)第一層容器 。 ? 第三層容器：放在一個(gè)運(yùn)輸用外層包裝內(nèi) ， 應(yīng)易于消毒 。 ? （ 5） 樣品的接收 ? 打開標(biāo)本容器時(shí)要小心 ， 以防內(nèi)容物潑濺 。 同時(shí)應(yīng)戴口罩 、防護(hù)眼鏡 ， 以防皮膚或粘膜污染 。 并要將樣品情況立即通知送樣人 。 可作為對(duì) HIV感染者 /AIDS病人的診斷 、 報(bào)告和處理的實(shí)驗(yàn)室依據(jù) 。 ? （ 2） HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 ? 應(yīng)符合 《 全國艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范 （ 1997年版 ）》 中對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員 、 建筑設(shè)施和設(shè)備等條件的要求 。 ? （ 3） HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn) ? HIV抗體檢測(cè)的目的： HIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè) 、 診斷 、 血液篩查 。 ? 以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體 HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測(cè) ， 包括臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè) 、 術(shù)前檢測(cè) 、 根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等 。 ? HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)： ? 篩查試驗(yàn)陽性不能出陽性報(bào)告 。 ? 嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作 。 ? （ 4） HIV抗體檢測(cè)的篩查方法 ? 常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗(yàn) （ ELISA） 快速檢測(cè) （ RT） 及其它檢測(cè) ? 隨著對(duì) HIV感染者和 AIDS病人抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的進(jìn)展 ， 及對(duì)無癥狀 HIV感染者提供自愿咨詢檢測(cè) （ VCT） 的迫切需求 ， 簡(jiǎn)便 、快速的 HIV檢測(cè)方法被廣泛應(yīng)用 。 當(dāng)待檢樣品含有 HIV抗體時(shí) ， 經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原 抗體反應(yīng) ， 根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果 。 ? ② 斑點(diǎn) EIA（ dotEIA） ：以硝酸纖維膜為載體 ， 將 HIV抗原滴在膜上成點(diǎn)狀 ， 即為固相抗原 。 陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn) 。 ? ③ 斑點(diǎn)免疫膠體金 （ 或膠體硒 ） 快速試驗(yàn)： 與斑點(diǎn) EIA相似 ， 也是以硝酸纖維膜為載體 。 試劑穩(wěn)定 ， 可室溫長期保存 。 目前已有在國內(nèi)被 SFDA批準(zhǔn)注冊(cè)的國外進(jìn)口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品 。 ? ④ 艾滋病唾液檢測(cè)卡： 在硝酸纖維膜上包被人工合成的 HIVgp41/gp36蛋白抗原 ， 可同時(shí)檢測(cè)含在唾液中的 HIV1/HIV2抗體 ， 原理為酶免疫間接法 。 但樣品預(yù)處理時(shí)間長且售價(jià)較高 。 ? ⑤ 其它快速篩查試驗(yàn)方法：家庭 HIV檢測(cè) （ Home Access System） 等 。 主要適用于靜脈注射毒品 （ IDUs） 人群和其它高危人群的大面積流行病學(xué)調(diào)查 、監(jiān)測(cè) 。 （ 5） HIV抗體篩查檢測(cè)中初篩和復(fù)檢試驗(yàn)的檢測(cè)和報(bào)告方法 ? 根據(jù)檢測(cè)目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩和重復(fù)檢測(cè)（復(fù)檢）。 ? 備好試劑盒 、 待檢樣品和外部對(duì)照質(zhì)控血清后 ， 按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護(hù)要求進(jìn)行篩查檢測(cè) 。 ? NC界限范圍： NC均值＜ NC＜ NC均值 。 ? PC1NC均值 ≥ ， PC2