【正文】 注射毒品 （ IDUs） 人群和其它高危人群的大面積流行病學(xué)調(diào)查 、監(jiān)測(cè) 。 但樣品預(yù)處理時(shí)間長(zhǎng)且售價(jià)較高 。 目前已有在國(guó)內(nèi)被 SFDA批準(zhǔn)注冊(cè)的國(guó)外進(jìn)口試劑和國(guó)內(nèi)產(chǎn)品 。 ? ③ 斑點(diǎn)免疫膠體金 （ 或膠體硒 ） 快速試驗(yàn)： 與斑點(diǎn) EIA相似 ， 也是以硝酸纖維膜為載體 。 ? ② 斑點(diǎn) EIA（ dotEIA） ：以硝酸纖維膜為載體 ， 將 HIV抗原滴在膜上成點(diǎn)狀 ， 即為固相抗原 。 ? （ 4） HIV抗體檢測(cè)的篩查方法 ? 常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗(yàn) （ ELISA） 快速檢測(cè) （ RT） 及其它檢測(cè) ? 隨著對(duì) HIV感染者和 AIDS病人抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的進(jìn)展 ， 及對(duì)無(wú)癥狀 HIV感染者提供自愿咨詢(xún)檢測(cè) （ VCT） 的迫切需求 ， 簡(jiǎn)便 、快速的 HIV檢測(cè)方法被廣泛應(yīng)用 。 ? HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)： ? 篩查試驗(yàn)陽(yáng)性不能出陽(yáng)性報(bào)告 。 ? （ 3） HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn) ? HIV抗體檢測(cè)的目的： HIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè) 、 診斷 、 血液篩查 。 可作為對(duì) HIV感染者 /AIDS病人的診斷 、 報(bào)告和處理的實(shí)驗(yàn)室依據(jù) 。 同時(shí)應(yīng)戴口罩 、防護(hù)眼鏡 ， 以防皮膚或粘膜污染 。 ? 第三層容器：放在一個(gè)運(yùn)輸用外層包裝內(nèi) ， 應(yīng)易于消毒 。 在試管的周?chē)鷳?yīng)墊有緩沖吸水材料 ， 以免碰碎 。 ? （ 2）應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽喝鏑D4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定可選用 K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉， HIV病毒分離、核酸定性 /定量檢測(cè)可選用 K3EDTA或枸櫞酸鈉。 ? ：樣品的采集和處理 ， HIV抗體的檢測(cè) （ 目的 、 要點(diǎn) 、 方法及結(jié)果報(bào)告 ） ,HIVP24抗原檢測(cè) （ 方法 、 結(jié)果報(bào)告和解釋 ） ， 艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等 。 ? VCT(自愿咨詢(xún)檢測(cè) )和當(dāng)前防治工作的需求 ， 新增了以下內(nèi)容 : HIV抗體檢測(cè)的替代策略 ， 嬰幼兒 HIV感染診斷 ， HIV RNA定量測(cè)定 （ 病毒載量測(cè)定 ） ， CD4+/CD8+ T淋巴細(xì)胞檢測(cè) ， 職業(yè)暴露預(yù)防和補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)室意外事故緊急處理措施 。 ? （ 3）樣品的保存 用于 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品不能長(zhǎng)期保存，樣品采集時(shí)間超過(guò) 48h則不可檢測(cè)。 隨樣品應(yīng)附有送檢單 ， 送檢單應(yīng)與樣品分開(kāi)放置 。 在第三層容器外面要貼標(biāo)簽 （ 數(shù)量 ， 收 、發(fā)件人 ） 。 ? 如果污染過(guò)重或者認(rèn)為樣品不能被接受 ，則應(yīng)將樣品安全廢棄 。 并規(guī)定了規(guī)范性引用文件 。 ? 以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群 HIV感染率及其變化趨勢(shì)而進(jìn)行的檢測(cè) ， 檢測(cè)的人群包括各類(lèi)高危人群和一般人群 。 ? 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （ SOP） 。 常用的主要有以下幾種： ? ① 明膠顆粒凝集試驗(yàn) （ PA） ： PA是 HIV血清抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法 ， 是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體 ， 與待檢樣品作用 ，混勻后保溫 （ 一般為室溫 ） 。 加血清樣品作用 ， 以后步驟同ELISA。 區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體 ， 而代之以紅色的膠體金（ 或膠體硒 ） A蛋白 ， 用滲濾 （ 或?qū)游?） 法作為洗滌方法 。 一般可在 10?30min內(nèi)判讀結(jié)果 。 以唾液為樣品測(cè)定 HIV抗體的 ELISA、 免疫印跡法 （ WB） 試劑美國(guó) FDA已批準(zhǔn) 。 篩查陽(yáng)性者仍需采血做確認(rèn)試驗(yàn)才能確定 。 ? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? ① 陰性對(duì)照 （ NC） ， HIV1陽(yáng)性對(duì)照 （ PC1） ，HIV2陽(yáng)性對(duì)照 （ PC2） NC 必須＜ ， 排除 NC≥ ， 計(jì)算 NC平均值 。 ? 如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測(cè)或確認(rèn) ， 需要填寫(xiě)“ HIV抗體復(fù)測(cè)送檢單 ” （ 附表 2） ， 經(jīng) 1名檢驗(yàn)人員和 1名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱(chēng)的人員審核簽字 。 ? 對(duì)篩查陰性和陽(yáng)性者 ， 均需做好檢測(cè)后咨詢(xún) 。 ? 符合 HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn) ， 報(bào)告 “ HIV抗體陰性（ ） ” 。 ） ” ， 在備注中應(yīng)注明 “ 3個(gè)月后復(fù)檢 ” ，同時(shí)進(jìn)行以下處理： ? 1) 隨訪復(fù)檢：每 3個(gè)月隨訪復(fù)檢 1次 ， 連續(xù) 2次 ，共 6個(gè)月 。 ? 省艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室難以確認(rèn)的樣品 ，送國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn) 。 ? HIV1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷 。 ? 為了提高檢測(cè)血清中 P24抗原的敏感性 ， 需先將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測(cè)定 ， 目前已發(fā)展了 ICD P24抗原 （ immunplex disassociate，免疫復(fù)合物解離 ， ICD） 測(cè)定試劑 ， 用于 HIV1 P24抗原測(cè)定 。 ? HIV1P24抗原檢測(cè)的敏感性為 30?90％ ， 低于病毒載量測(cè)定 。 ? 在 18月齡以前可以用多種不同的非抗體依賴(lài)性的檢驗(yàn)方法對(duì)新生兒 HIV感染進(jìn)行輔助診斷 ， 包括：HIV P24抗原檢測(cè) 、 病毒分離培養(yǎng) 、 RNA或 DNA測(cè)定 。 ? ② 根據(jù)本 《 規(guī)范 》 制訂本實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （ SSOP） ， 該制度或程序應(yīng)適用于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件 ， 并與實(shí)驗(yàn)室其它規(guī)定相一致 。 ? ⑤ 實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)組織對(duì)突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進(jìn)行調(diào)查 、 登記 、 處理和報(bào)告 。 實(shí)驗(yàn)室的安全責(zé)任人要對(duì)工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé) ， 所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全 。 ? ④ 新調(diào)入人員 、 外來(lái)合作 、 進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前必須經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室主任的批準(zhǔn) 。 ? 3） 建立嚴(yán)格的保密制度并定期檢查 ? ① 與 HIV/AIDS相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密 ， 包括送檢單與檢測(cè)記錄的保管 、 報(bào)告單的發(fā)放和工作人員年度采血檢測(cè)等 。 ? 4） 嚴(yán)格質(zhì)量管理 ? ① 按要求做好安全操作的管理以及檢測(cè)試劑的選擇 、 檢測(cè)工作的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng) 。 ? 各級(jí)實(shí)驗(yàn)室血清庫(kù) /毒種庫(kù)的設(shè)置按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行 。 ? ② 從艾滋病實(shí)驗(yàn)室出來(lái)的所有廢棄物 ， 包括不再需要的樣品 、 培養(yǎng)物和其它物品 ， 均應(yīng)視為感染性廢棄物 ， 應(yīng)置于專(zhuān)用的密封防漏容器中 ， 安全運(yùn)至消毒室 ， 并在高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄 。 ? ① 廢棄物缸： %次氯酸鈉 。 器械可用 2%戊二醛消毒 。 ? ② 兩種試劑復(fù)測(cè)均為陽(yáng)性 ， 且其中第三代 ELISA試劑復(fù)測(cè)樣品 OD值與臨界值 （ Cutoff） 的比值（ S/CO） ≥ ， 上報(bào)疫情 （ 附表 4） 。 ? 檢測(cè)程序及結(jié)果報(bào)告： ? ① 先用第一種篩查試劑 （ ELISA1） 檢測(cè) ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)報(bào)告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告 “ HIV抗體待復(fù)查 ” ， 并用第一種和第二種酶聯(lián)試劑 （ ELISA1和 ELISA2） 復(fù)檢 。 ? ② 第二種篩查試劑檢測(cè)陰性則用第三種篩查試劑（ 另一種高特異性試劑 ） 檢測(cè)；第二種篩查試劑檢測(cè)為陽(yáng)性則按疑似陽(yáng)性咨詢(xún) ， 建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗(yàn) ， 按確認(rèn)試驗(yàn)的結(jié)果報(bào)告 。 各區(qū)的功能是： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制 、 分裝和保存 。 ? 2） 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi) ， 須使用不同的房間 ， 兩區(qū)之間最好有一定的間隔 。 ? ③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用 。 ? 2）各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專(zhuān)用，開(kāi)展特定試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專(zhuān)用設(shè)備。 ? ④ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱 、 離心機(jī) 、 加樣器 、 電泳儀 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 、 核酸污染物處理設(shè)備等 。 ? 核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn) （ NASBA） 。 需要時(shí)間較短。 動(dòng)態(tài)范圍最大。 4 小時(shí)之內(nèi)分離血清或血漿，運(yùn)輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍 ? （ 5） HIV核酸定量檢測(cè)的意義 ? 1） 輔助診斷 ? 在一般情況下 ， HIV抗體檢測(cè)足以對(duì) HIV感染與否做出正確診斷 ， 但在特殊情況下 ， 單純抗體檢測(cè)不足以完成明確的判定 ， 如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式 ， 特別是不確定反應(yīng)時(shí) ，RNA的測(cè)定可提供非常有用的證據(jù) 。因此 ， 使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測(cè)數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷 。 因此早期病毒 RNA測(cè)定具有特殊的意義 。 因此定期進(jìn)行病毒載量的檢測(cè)有助于確定疾病發(fā)展的階段 ， 以確定相應(yīng)的治療方案 。 通常在病毒載量達(dá)到一定水平后 （ 如35， 000?50， 000c/ml） 抗病毒治療才具有良好的效果 。501?3， 000c/ml時(shí) %。 ? 當(dāng) HIV感染者 CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)＜ 200/μ l時(shí) ， 病毒載量與 3?6個(gè)月發(fā)展至 AIDS的危險(xiǎn)為：＜ 10，000c/ml為 %。 在 CD4+ 細(xì)胞數(shù)相同的情況下 ，年紀(jì)大的比年輕患者發(fā)展至 AIDS的危險(xiǎn)更大（ AIDS 2023； 18： 5158.） 。 ? ② 流式細(xì)胞儀檢測(cè)區(qū)用于制備好的樣品上機(jī)檢測(cè) 。 在血球分析儀生產(chǎn)商允許的時(shí)間范圍內(nèi)檢測(cè) ， 不超過(guò) 30h， 不檢測(cè)超出抗凝時(shí)間范圍的樣品 。 ②采血后立即握住試管兩端，顛倒混勻數(shù)次，將血液與抗凝劑混勻，以防止凝固。 ?2）樣品運(yùn)輸 ?①在室溫下（ 18?23℃ ）保存和運(yùn)輸樣品，避免極端溫度（冷凍或過(guò)熱）。 ?②盡可能快地將樣品送至免疫表型檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。 ?3）樣品接收 ?樣品到達(dá)以后立即檢查試管及其所裝的血樣。 ?③不可檢測(cè)凝血的樣品。不要馬上加熱和冷凍樣品以使其達(dá)到室溫 ， 因?yàn)檫@樣會(huì)對(duì)免疫表型檢測(cè)的結(jié)果產(chǎn)生不利的影響 ， 散射光模式的不正常會(huì)顯示出所受到的影響 。 目前用于 CD4+ 和 CD8+ T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測(cè)方法分為自動(dòng)檢測(cè)方法和手工操作法 。 ? 2） 根據(jù) CD命名標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告數(shù)據(jù) ， 用一個(gè)簡(jiǎn)短的描述解釋命名的意義 。 在 CD4+ 和 CD8+ 的判定中重要的是排除其它細(xì)胞 （ 非 T細(xì)胞 ） 的干擾 。 ? ① 用淋巴細(xì)胞的總數(shù) （ 來(lái)自于 WBC及分類(lèi) ） 乘以淋巴細(xì)胞亞群的百分率 （ 從流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)中得到 ） ， 計(jì)算絕對(duì)數(shù)值 。 在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群相互作用 ， 維持著機(jī)體正常免疫功能 。 因而 ， 對(duì) HIV感染者和 AIDS病人定期進(jìn)行 CD4+、 CD8+T淋巴細(xì)胞 檢測(cè)具有十分重要的意義 。 ? 3）幫助確定抗 HIV藥物治療及預(yù)防機(jī)會(huì)性感染治療的適應(yīng)癥，如當(dāng) CD4+ T淋巴細(xì)胞＜ 200/ul時(shí)，應(yīng)給予抗卡氏肺孢子蟲(chóng)肺炎的預(yù)防性治療。在“意外和事故的緊急處理措施”中新增了“低溫蒸汽甲醛氣體消毒”： ? 如果實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生了重大潑濺事故，應(yīng)按嚴(yán)重情況處理，并采取以下措施： ? ①?gòu)奈廴咎幨枭⑷藛T，但要防止污染擴(kuò)散； ? ②控制污染 —— 鎖門(mén)并防止進(jìn)一步進(jìn)入； ? ③通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)、安全負(fù)責(zé)人等，以便查清情況，確定消毒處理的程序； ? ④如果認(rèn)為合適，可進(jìn)行生物安全柜和 /或?qū)嶒?yàn)室的低溫蒸汽甲醛氣體消毒，但生物安全柜和 /或?qū)嶒?yàn)室必須有可靠的密閉性能，人員必須完全離開(kāi)。 ? ⑤發(fā)生溢出后應(yīng)離開(kāi)房間約 30分鐘。 ? HIV/AIDS的職業(yè)暴露后預(yù)防（ Postexposure Prophylaxis， PEP）應(yīng)包括急救、對(duì)暴露級(jí)別的評(píng)估、暴露源嚴(yán)重程度的評(píng)估、預(yù)防性用藥的推薦處理方案、報(bào)告與保密。如果是粘膜暴露，應(yīng)用生理鹽水（或清水）反復(fù)沖洗。 ?