【正文】 注射毒品 （ IDUs） 人群和其它高危人群的大面積流行病學調(diào)查 、監(jiān)測 。 但樣品預處理時間長且售價較高 。 目前已有在國內(nèi)被 SFDA批準注冊的國外進口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品 。 ? ③ 斑點免疫膠體金 （ 或膠體硒 ） 快速試驗： 與斑點 EIA相似 ， 也是以硝酸纖維膜為載體 。 ? ② 斑點 EIA（ dotEIA） ：以硝酸纖維膜為載體 ， 將 HIV抗原滴在膜上成點狀 ， 即為固相抗原 。 ? （ 4） HIV抗體檢測的篩查方法 ? 常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗 （ ELISA） 快速檢測 （ RT） 及其它檢測 ? 隨著對 HIV感染者和 AIDS病人抗逆轉錄病毒治療的進展 ， 及對無癥狀 HIV感染者提供自愿咨詢檢測 （ VCT） 的迫切需求 ， 簡便 、快速的 HIV檢測方法被廣泛應用 。 ? HIV抗體檢測的要點： ? 篩查試驗陽性不能出陽性報告 。 ? （ 3） HIV抗體檢測的目的和要點 ? HIV抗體檢測的目的： HIV抗體檢測可用于監(jiān)測 、 診斷 、 血液篩查 。 可作為對 HIV感染者 /AIDS病人的診斷 、 報告和處理的實驗室依據(jù) 。 同時應戴口罩 、防護眼鏡 ， 以防皮膚或粘膜污染 。 ? 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi) ， 應易于消毒 。 在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料 ， 以免碰碎 。 ? （ 2）應根據(jù)實驗要求選用適當?shù)目鼓齽喝鏑D4+/CD8+T淋巴細胞測定可選用 K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉， HIV病毒分離、核酸定性 /定量檢測可選用 K3EDTA或枸櫞酸鈉。 ? ：樣品的采集和處理 ， HIV抗體的檢測 （ 目的 、 要點 、 方法及結果報告 ） ,HIVP24抗原檢測 （ 方法 、 結果報告和解釋 ） ， 艾滋病檢測實驗室安全防護等 。 ? VCT(自愿咨詢檢測 )和當前防治工作的需求 ， 新增了以下內(nèi)容 : HIV抗體檢測的替代策略 ， 嬰幼兒 HIV感染診斷 ， HIV RNA定量測定 （ 病毒載量測定 ） ， CD4+/CD8+ T淋巴細胞檢測 ， 職業(yè)暴露預防和補充實驗室意外事故緊急處理措施 。 ? （ 3）樣品的保存 用于 CD4+/CD8+T淋巴細胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過 48h則不可檢測。 隨樣品應附有送檢單 ， 送檢單應與樣品分開放置 。 在第三層容器外面要貼標簽 （ 數(shù)量 ， 收 、發(fā)件人 ） 。 ? 如果污染過重或者認為樣品不能被接受 ，則應將樣品安全廢棄 。 并規(guī)定了規(guī)范性引用文件 。 ? 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群 HIV感染率及其變化趨勢而進行的檢測 ， 檢測的人群包括各類高危人群和一般人群 。 ? 嚴格遵守實驗室標準操作程序 （ SOP） 。 常用的主要有以下幾種： ? ① 明膠顆粒凝集試驗 （ PA） ： PA是 HIV血清抗體檢測的一種簡便方法 ， 是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體 ， 與待檢樣品作用 ，混勻后保溫 （ 一般為室溫 ） 。 加血清樣品作用 ， 以后步驟同ELISA。 區(qū)別在于不用酶標記抗體 ， 而代之以紅色的膠體金（ 或膠體硒 ） A蛋白 ， 用滲濾 （ 或?qū)游?） 法作為洗滌方法 。 一般可在 10?30min內(nèi)判讀結果 。 以唾液為樣品測定 HIV抗體的 ELISA、 免疫印跡法 （ WB） 試劑美國 FDA已批準 。 篩查陽性者仍需采血做確認試驗才能確定 。 ? 實驗結果 ? ① 陰性對照 （ NC） ， HIV1陽性對照 （ PC1） ，HIV2陽性對照 （ PC2） NC 必須＜ ， 排除 NC≥ ， 計算 NC平均值 。 ? 如需送上級實驗室進行復測或確認 ， 需要填寫“ HIV抗體復測送檢單 ” （ 附表 2） ， 經(jīng) 1名檢驗人員和 1名具有中級以上技術職稱的人員審核簽字 。 ? 對篩查陰性和陽性者 ， 均需做好檢測后咨詢 。 ? 符合 HIV抗體陰性判斷標準 ， 報告 “ HIV抗體陰性（ ） ” 。 ） ” ， 在備注中應注明 “ 3個月后復檢 ” ，同時進行以下處理： ? 1) 隨訪復檢：每 3個月隨訪復檢 1次 ， 連續(xù) 2次 ，共 6個月 。 ? 省艾滋病確認中心實驗室難以確認的樣品 ，送國家艾滋病參比實驗室確認 。 ? HIV1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷 。 ? 為了提高檢測血清中 P24抗原的敏感性 ， 需先將血清中免疫復合物解離后再進行測定 ， 目前已發(fā)展了 ICD P24抗原 （ immunplex disassociate，免疫復合物解離 ， ICD） 測定試劑 ， 用于 HIV1 P24抗原測定 。 ? HIV1P24抗原檢測的敏感性為 30?90％ ， 低于病毒載量測定 。 ? 在 18月齡以前可以用多種不同的非抗體依賴性的檢驗方法對新生兒 HIV感染進行輔助診斷 ， 包括：HIV P24抗原檢測 、 病毒分離培養(yǎng) 、 RNA或 DNA測定 。 ? ② 根據(jù)本 《 規(guī)范 》 制訂本實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序 （ SSOP） ， 該制度或程序應適用于現(xiàn)有的實驗條件 ， 并與實驗室其它規(guī)定相一致 。 ? ⑤ 實驗室主任負責組織對突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進行調(diào)查 、 登記 、 處理和報告 。 實驗室的安全責任人要對工作和環(huán)境的安全負責 ， 所有工作人員都有責任保護自己和他人的安全 。 ? ④ 新調(diào)入人員 、 外來合作 、 進修和學習的人員在進入實驗室之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準 。 ? 3） 建立嚴格的保密制度并定期檢查 ? ① 與 HIV/AIDS相關檢測項目的所有資料均應嚴格保密 ， 包括送檢單與檢測記錄的保管 、 報告單的發(fā)放和工作人員年度采血檢測等 。 ? 4） 嚴格質(zhì)量管理 ? ① 按要求做好安全操作的管理以及檢測試劑的選擇 、 檢測工作的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評 。 ? 各級實驗室血清庫 /毒種庫的設置按有關規(guī)定執(zhí)行 。 ? ② 從艾滋病實驗室出來的所有廢棄物 ， 包括不再需要的樣品 、 培養(yǎng)物和其它物品 ， 均應視為感染性廢棄物 ， 應置于專用的密封防漏容器中 ， 安全運至消毒室 ， 并在高壓消毒后再進行處理或廢棄 。 ? ① 廢棄物缸： %次氯酸鈉 。 器械可用 2%戊二醛消毒 。 ? ② 兩種試劑復測均為陽性 ， 且其中第三代 ELISA試劑復測樣品 OD值與臨界值 （ Cutoff） 的比值（ S/CO） ≥ ， 上報疫情 （ 附表 4） 。 ? 檢測程序及結果報告： ? ① 先用第一種篩查試劑 （ ELISA1） 檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應報告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性反應則報告 “ HIV抗體待復查 ” ， 并用第一種和第二種酶聯(lián)試劑 （ ELISA1和 ELISA2） 復檢 。 ? ② 第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（ 另一種高特異性試劑 ） 檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢 ， 建議進一步做確認試驗 ， 按確認試驗的結果報告 。 各區(qū)的功能是： ? ① 試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制 、 分裝和保存 。 ? 2） 擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開 ， 須使用不同的房間 ， 兩區(qū)之間最好有一定的間隔 。 ? ③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用 。 ? 2）各區(qū)域的設施和設備應為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應根據(jù)要求在相應區(qū)域放置專用設備。 ? ④ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱 、 離心機 、 加樣器 、 電泳儀 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設備 、 廢棄物容器 、 核酸污染物處理設備等 。 ? 核酸序列擴增試驗 （ NASBA） 。 需要時間較短。 動態(tài)范圍最大。 4 小時之內(nèi)分離血清或血漿，運輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍 ? （ 5） HIV核酸定量檢測的意義 ? 1） 輔助診斷 ? 在一般情況下 ， HIV抗體檢測足以對 HIV感染與否做出正確診斷 ， 但在特殊情況下 ， 單純抗體檢測不足以完成明確的判定 ， 如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應形式 ， 特別是不確定反應時 ，RNA的測定可提供非常有用的證據(jù) 。因此 ， 使用此指標應綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進行綜合判斷 。 因此早期病毒 RNA測定具有特殊的意義 。 因此定期進行病毒載量的檢測有助于確定疾病發(fā)展的階段 ， 以確定相應的治療方案 。 通常在病毒載量達到一定水平后 （ 如35， 000?50， 000c/ml） 抗病毒治療才具有良好的效果 。501?3， 000c/ml時 %。 ? 當 HIV感染者 CD4+T細胞計數(shù)＜ 200/μ l時 ， 病毒載量與 3?6個月發(fā)展至 AIDS的危險為：＜ 10，000c/ml為 %。 在 CD4+ 細胞數(shù)相同的情況下 ，年紀大的比年輕患者發(fā)展至 AIDS的危險更大（ AIDS 2023； 18： 5158.） 。 ? ② 流式細胞儀檢測區(qū)用于制備好的樣品上機檢測 。 在血球分析儀生產(chǎn)商允許的時間范圍內(nèi)檢測 ， 不超過 30h， 不檢測超出抗凝時間范圍的樣品 。 ②采血后立即握住試管兩端，顛倒混勻數(shù)次，將血液與抗凝劑混勻，以防止凝固。 ?2）樣品運輸 ?①在室溫下（ 18?23℃ ）保存和運輸樣品，避免極端溫度（冷凍或過熱）。 ?②盡可能快地將樣品送至免疫表型檢測實驗室。 ?3）樣品接收 ?樣品到達以后立即檢查試管及其所裝的血樣。 ?③不可檢測凝血的樣品。不要馬上加熱和冷凍樣品以使其達到室溫 ， 因為這樣會對免疫表型檢測的結果產(chǎn)生不利的影響 ， 散射光模式的不正常會顯示出所受到的影響 。 目前用于 CD4+ 和 CD8+ T淋巴細胞計數(shù)的檢測方法分為自動檢測方法和手工操作法 。 ? 2） 根據(jù) CD命名標準報告數(shù)據(jù) ， 用一個簡短的描述解釋命名的意義 。 在 CD4+ 和 CD8+ 的判定中重要的是排除其它細胞 （ 非 T細胞 ） 的干擾 。 ? ① 用淋巴細胞的總數(shù) （ 來自于 WBC及分類 ） 乘以淋巴細胞亞群的百分率 （ 從流式細胞儀的數(shù)據(jù)中得到 ） ， 計算絕對數(shù)值 。 在正常機體內(nèi)各淋巴細胞亞群相互作用 ， 維持著機體正常免疫功能 。 因而 ， 對 HIV感染者和 AIDS病人定期進行 CD4+、 CD8+T淋巴細胞 檢測具有十分重要的意義 。 ? 3）幫助確定抗 HIV藥物治療及預防機會性感染治療的適應癥，如當 CD4+ T淋巴細胞＜ 200/ul時，應給予抗卡氏肺孢子蟲肺炎的預防性治療。在“意外和事故的緊急處理措施”中新增了“低溫蒸汽甲醛氣體消毒”： ? 如果實驗室一旦發(fā)生了重大潑濺事故，應按嚴重情況處理，并采取以下措施： ? ①從污染處疏散人員，但要防止污染擴散； ? ②控制污染 —— 鎖門并防止進一步進入； ? ③通知實驗室主管領導、安全負責人等，以便查清情況，確定消毒處理的程序； ? ④如果認為合適，可進行生物安全柜和 /或?qū)嶒炇业牡蜏卣羝兹怏w消毒，但生物安全柜和 /或?qū)嶒炇冶仨氂锌煽康拿荛]性能，人員必須完全離開。 ? ⑤發(fā)生溢出后應離開房間約 30分鐘。 ? HIV/AIDS的職業(yè)暴露后預防（ Postexposure Prophylaxis， PEP）應包括急救、對暴露級別的評估、暴露源嚴重程度的評估、預防性用藥的推薦處理方案、報告與保密。如果是粘膜暴露，應用生理鹽水（或清水）反復沖洗。 ?