【文章內(nèi)容簡介】 訪 陰性 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報告 EL I SA 1+ EL I SA 2 一陰一陽 兩種均陰性 圖 4 替代策略 Ⅱ （高危人群 VCT檢測策略）檢測流程 ? 3） 替代策略 Ⅲ （ 高流行地區(qū)一般人群及其它地區(qū)各類人群 VCT檢測策略 ， 圖 5） ? 檢測程序及結(jié)果報告： ? ① 先用一種高敏感性篩查試劑檢測 ， 出現(xiàn)陰性反應(yīng)報告 HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性則用第二種篩查試劑 （ 高特異性 ） 復(fù)檢 。 ? ② 第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（ 另一種高特異性試劑 ） 檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢 ， 建議進一步做確認試驗 ， 按確認試驗的結(jié)果報告 。 ? ③ 第三種篩查試劑檢測為陰性則報告 HIV抗體陰性；第三種試劑檢測為陽性按疑似陽性咨詢 ， 建議進一步做確認試驗 ， 按確認試驗的結(jié)果報告 。 陰性 陽性 樣品 篩查試劑 1（高敏感性） 陽性 陰性 提供陽性咨詢 出具“ H I V 抗體陽性”報告 提供咨詢 隨訪 提供陰性咨詢 出具“ H I V 抗體陰性”報告 篩查試劑 2（高特異性） 篩查試劑 3（高特異性） 陽性 陰性 提供疑似陽性咨詢 建議進一步做確認試驗 陽性 不確定 陰性 圖 5 替代策略 Ⅲ （一般人群 VCT策略）的檢測及結(jié)果報告流程圖 ? HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） ? 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 ? 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) ? 嬰兒 9~12月齡進行 HIV抗體檢測 ? 視為 HIV抗體（ ）常規(guī)兒童保健 ? 18月齡時再進行 HIV抗體檢測 ? 結(jié)果（ +） ? 用另一種檢測試劑再次檢測 ? 結(jié)果（ ） ? 結(jié)果（ +） ? 結(jié)果（ ） ? 對 HIV（ +）產(chǎn)婦進行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 對 H I V （ + ）產(chǎn)婦進行咨詢，指導(dǎo)人工喂養(yǎng) 嬰兒 9~ 12 月齡進行 H I V 抗體檢測 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 視為 H I V 抗體（ ）常規(guī)兒童保健 18 月齡時再進行 H I V 抗體檢測 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ ） 結(jié)果（ + ） 用另一種檢測試劑再次檢測 結(jié)果（ + ） 確認試驗 結(jié)果（ + ） 納入當(dāng)?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng) HIV感染診斷 （ 根據(jù)替代策略制定 ） 嬰兒隨訪和檢測服務(wù)流程 3． HIV RNA定量測定（病毒載量測定） （ 1） 實驗室功能分區(qū) 實驗室原則上應(yīng)分為 4個獨立工作區(qū) ? 1） 試劑準(zhǔn)備區(qū) 、 樣品處理區(qū) 、 擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū) ， 并設(shè)在不同房間 。 前兩區(qū)為擴增前區(qū) ，后兩區(qū)為擴增后區(qū) 。 各區(qū)的功能是： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴增試劑的配制 、 分裝和保存 。 ? ② 樣品處理區(qū)：樣品登記 、 分裝；核酸提取 、 保存和加樣 。 ? ③ 擴增區(qū)：核酸擴增 。 ? ④ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定 、 結(jié)果分析 、登記及報告 。 ? 2） 擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開 ， 須使用不同的房間 ， 兩區(qū)之間最好有一定的間隔 。 ? 3） 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制 。 ? 4） 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)： ? ① 在生物安全柜內(nèi)操作 。 ? ② 每個實驗人員 、 實驗組分別使用各自的試劑及耗材 。 ? ③ 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用 。 ? ④ 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。 ? （ 2） 人員 ? 進行 HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格 ， 并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn) 。 ? （ 3） 設(shè)施和設(shè)備 ? 1） 根據(jù)檢測項目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備 。 ? 2）各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。 ? 以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備： ? ① 試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱 、 潔凈工作臺 、 離心機 、 加樣器 、 振蕩器 、 廢棄物容器 。 ? ② 樣品處理區(qū)：冰箱 、 生物安全柜 、 離心機 、 加樣器 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 。 ? ③ 擴增區(qū)：核酸擴增設(shè)備 、 冰箱 、 離心機 、 加樣器 、 廢棄物容器 。 ? ④ 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱 、 離心機 、 加樣器 、 電泳儀 、 振蕩器 、 恒溫水浴 、 上下水設(shè)備 、 廢棄物容器 、 核酸污染物處理設(shè)備等 。 ? ⑤ 配備 80℃ 冰箱 。 ? 3） 各區(qū)域應(yīng)備有工作人員專用的工作服或一次性工作服 、 帽子和鞋套 ， 必要時配備防護眼鏡和 /或口罩 。 ? （ 3） 方法和試劑 ? 1） 方法 ? 常用的 HIV RNA定量測定方法有 : ? 逆轉(zhuǎn)錄 PCR試驗 （ RTPCR） 。 ? 核酸序列擴增試驗 （ NASBA） 。 ? 分支 DNA雜交試驗 （ bDNA） 。 ? 不同病毒載量檢測方法的比較見表 2 （ John 、 Joel ,Medical Management of HIV Infection 2023 Edition p15） 表 2 不同病毒載量檢測方法的比較 Roche Bayer b i o M e r i e u x 商品名 A m p l i c o r Versant N u c l i S e n s 技術(shù)原理 RT PCR bDNA NASBA 結(jié)果比較 RT PCR 試驗的結(jié)果近似于 或 版 b D N A 試驗的結(jié)果 bDNA 2 . 0 版或 3 . 0 版的試驗結(jié)果與 R o c h e R T PCR實驗的結(jié)果具有可比性 結(jié)果與 RT P C R 和 b D N A 具有可比性，但支持性資料少于前者 優(yōu)點 / 缺點 與 Bayer 的方法相比假陽性較少。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 需要時間較短。 動 態(tài)范圍廣。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 能夠使用組織或體液樣品，例如陰道分泌物。 動態(tài)范圍最大。 已獲 FDA 批準(zhǔn)。 動態(tài)范圍 標(biāo)準(zhǔn)：（ 版） 400 750 , 0 0 0 c / m l 超敏：（ 版） 50 75 , 0 0 0 c / m l bDNA 3 . 0 版： 75 500 , 0 0 0 c / m l N u c l i s e n s H I V 1 Q T ： 176 3 , 5 0 0 , 0 0 0 c / m l 取決于標(biāo)本量 擴增的亞型 版：只有 B 亞型 版： B G A H A G 標(biāo)本量 A m p l i c o r 0 . 2 m l 超敏 0 . 5 m l 1ml 10 μ l 2 ml 抗凝劑 EDTA EDTA EDTA 、肝素、全血、任何體液、PBMC 、精液、組織等 要求 6 小時之內(nèi)分離血漿，運輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 4 小時之內(nèi)分離血漿，運輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍。 4 小時之內(nèi)分離血清或血漿，運輸前在 20 ℃或 70 ℃冷凍 ? （ 5） HIV核酸定量檢測的意義 ? 1） 輔助診斷 ? 在一般情況下 ， HIV抗體檢測足以對 HIV感染與否做出正確診斷 ， 但在特殊情況下 ， 單純抗體檢測不足以完成明確的判定 ， 如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式 ， 特別是不確定反應(yīng)時 ，RNA的測定可提供非常有用的證據(jù) 。 雖然單純使用 RNA測定不能完全確定感染與否 ， 但當(dāng) RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時 （ 3，000c/ml） ， 感染發(fā)生的可能性非常大 。 ? 需要指出的是 ， 每一種 RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限 ， 即可以測出的最低拷貝數(shù) ， 通常在50?100c/ml以上 ， RNA定量檢測時未測出不等于樣品中不含有病毒 RNA。 ? 另外 ， 許多 AIDS病人 /HIV感染者在接受抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低的水平 ， 還有少數(shù) HIV感染者在感染后長期處于病毒水平非常低的狀態(tài) ， 進行 RNA測定時往往測不出來 。因此 ， 使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進行綜合判斷 。 ? 2） 早期診斷 ? 在 HIV感染的窗口期無法使用抗體檢測進行診斷 。 而在感染早期 ， 在抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個病毒載量的高峰 ， 此高峰通常高于發(fā)病時的血漿病毒水平 ， 并且有證據(jù)表明這個時期的病毒具有很高的感染能力 。 這個高峰在免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應(yīng)后 ， 尤其是在細胞免疫出現(xiàn)后開始下降 。 因此早期病毒 RNA測定具有特殊的意義 。 該方法也可用于 HIV感染孕婦所生嬰兒的早期輔助診斷 。 ? 目前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進行多個樣品混合后的 RNA檢測以減少窗口期危險 （ 降低 “ 殘余危險度 ” ） 。 ? 3） 病程監(jiān)控 ? 根據(jù) HIV感染發(fā)生后病毒載量具有一定的變化規(guī)律 ， 并且這種變化與疾病的進程有著密切的相關(guān)性 。 因此定期進行病毒載量的檢測有助于確定疾病發(fā)展的階段 ， 以確定相應(yīng)的治療方案 。 ? 通常在 HIV感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生的感染或其它臨床癥狀很難與 AIDS發(fā)病時的癥狀區(qū)別 ， 為確定一個剛發(fā)生的癥狀是否與 HIV的感染有關(guān) ，醫(yī)生往往需要觀察病人的實驗室指標(biāo) ， 病毒載量就是一個非常重要的指標(biāo) 。 ? 4） 指導(dǎo)治療方案及療效判定 ? 臨床實踐證明 ， 并非在任何情況下 HIV感染者都應(yīng)該進行抗病毒治療 。 這不單是經(jīng)濟上的原因 ， 更重要的是由于抗病毒藥物的副作用和療效原因 。 通常在病毒載量達到一定水平后 （ 如35， 000?50， 000c/ml） 抗病毒治療才具有良好的效果 。 ? 在進行治療后 ， 通過病毒水平的檢測才能確定治療是否有效 ， 通常在治療前后病毒水平降低 log以上才被認為臨床有效 。 ? 5） 預(yù)測疾病進程 ? HIV感染后疾病進程與病毒載量的關(guān)系十分密切 ， 觀察 HIV感染者病毒 RNA水平可大致預(yù)測其發(fā)病的可能 。 病毒載量與 6年發(fā)病率的關(guān)系為：500c/ml時 %。501?3， 000c/ml時 %。3，001?10， 000c/ml時 %。10， 001?30，000c/ml時 %。30， 000c/ml時則為 80%。 ? 當(dāng) HIV感染者 CD4+T細胞計數(shù)＜ 200/μ l時 ， 病毒載量與 3?6個月發(fā)展至 AIDS的危險為：＜ 10，000c/ml為 %。10， 000?29， 999c/ml為%。30， 000?99， 990c/ml為 %。＞ 100，00