臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證(新-臨床聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定的質(zhì)-展示頁
2025-02-15 09:22本頁面
【正文】 ？水浴箱和 /或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢n首先制備一個(gè)含 1～ 2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為 100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至 110～ 120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體。n 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測(cè)靶核酸的特性，對(duì)各種臨床樣本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。 標(biāo)本運(yùn)送 n 樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。 n 用于 RNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述緩沖液中 80℃ 或液氮下保存。 標(biāo)本保存n 臨床體液標(biāo)本長(zhǎng)期保存應(yīng)在 70℃ 下。標(biāo)本保存 n靶核酸 (尤其是 RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測(cè)定的有效性極為重要。 采樣及運(yùn)輸容器 n標(biāo)本的采集材料如棉簽應(yīng)為一次性使用；n運(yùn)輸容器亦應(yīng)為密閉的一次性裝置；n采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關(guān)試劑材料不應(yīng)對(duì)核酸擴(kuò)增及檢測(cè)過程造成干擾。采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)n 血清 (漿 )標(biāo)本 :溶血、脂血等；n 分泌物、痰：評(píng)價(jià)內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。一般來說，如果標(biāo)本的量對(duì)病原體培養(yǎng)夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增檢測(cè)。標(biāo)本的類型和采集量n 標(biāo)本的類型 : 血清 (漿 )、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)之間的關(guān)系臨床標(biāo)本收集、運(yùn)送、保存及其質(zhì)量控制 n標(biāo)本收集 n標(biāo)本保存n標(biāo)本運(yùn)送 標(biāo)本收集n 標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響 n 標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備 n 標(biāo)本的類型和采集量 n 采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià) n 采樣及運(yùn)輸容器 n 標(biāo)本采集中的防污染 標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響n 在疾病發(fā)展過程中，標(biāo)本采集過早或過晚都可能會(huì)給出假陰性結(jié)果。n 實(shí)驗(yàn)室測(cè)定： 標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)、測(cè)定的有效性和臨床診療價(jià)值。 定 義n 正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（）、標(biāo)準(zhǔn)差（ s）和概率來說明。 定 義n 批 (Run) 在相同條件下所獲得的一組測(cè)定。測(cè)定不精密度的主要來源是隨機(jī)誤差，以標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）和 /或變異系數(shù)（ CV）具體表示。定 義n 精密度 (Precision) 在一定條件下所獲得的獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間的一致性程度。對(duì)一分析物重復(fù)多次測(cè)定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測(cè)定的不準(zhǔn)確度。定 義 n 準(zhǔn)確度 (Accuracy) 待測(cè)物的測(cè)定值與其真值的一致性程度。當(dāng) EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)證的目的而評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)，常描述為實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)檢驗(yàn)（Proficiency testing, PT）。 定 義n 室間質(zhì)量評(píng)價(jià) （ External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明定 義n 質(zhì)量保證 (Quality Assurance,QA) 為一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計(jì)劃的和系統(tǒng)的措施 。 n 室內(nèi)質(zhì)量控制（ Internal Quality Control,IQC) 由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。在以前的文獻(xiàn)中， EQA常描述室間質(zhì)量控制。 準(zhǔn)確度不能直接以數(shù)值表示，通常以不準(zhǔn)確度來間接衡量。 n 偏差 (Bias) 待測(cè)物的測(cè)定值與一可接受參考值之間的差異。與準(zhǔn)確度一樣，精密度同樣也是以不精密度來間接表示。 SD或 CV越大，表示重復(fù)測(cè)定的離散度越大，精密度越差，反之則越好。 n 均值（ Mean） n 標(biāo)準(zhǔn)差（ Standard deviation, SD或 s） n 變異系數(shù)（ Coefficient of variation, CV） 定 義n 正態(tài)分布 (Gaussian distribution) 當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時(shí)間重復(fù)多次測(cè)定，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)足夠多時(shí)，如以橫軸表示測(cè)定值，縱軸表示在大量測(cè)定中相應(yīng)測(cè)定值的個(gè)數(shù)，則可得到一個(gè)兩頭低，中間高，中為所有測(cè)定值的均值，左右對(duì)稱的 “鐘形 ”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布 。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定步驟n 標(biāo)本收集： 選擇測(cè)定項(xiàng)目、標(biāo)本收集和保存。n 報(bào)告和解釋： 結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。 標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備n標(biāo)本采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物 ,但應(yīng)適度 ,過度清潔消毒有可能會(huì)去掉或破壞靶微生物 ,故標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備應(yīng)由訓(xùn)練有素的人員進(jìn)行 。n 標(biāo)本的采集量 :應(yīng)根據(jù)所測(cè)病原體而定。n 對(duì)于定量測(cè)定
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