酶聯(lián)免疫吸附測定法elisa在抗生素殘留檢測中的應用-展示頁
2025-08-10 14:19本頁面
【正文】 物的量）和酶產(chǎn)物呈現(xiàn)的色澤成正比，因此可以用分光光度計進行測定，從而計算出參與反應的抗原和抗體的量，從而進一步得知樣本中抗原的多少。這就是競爭法 ELISA的原理。其反應原理如（圖 218） ? 返回 競爭法 ELISA原理 （圖 218） 如圖所示 .在進行測定時首先將包被了抗體的酶標板的微孔分為測定孔和對照孔，在對照孔中加入已知濃度的系列標準品溶液和酶標記物；在測定孔中同時加入酶標記物和待檢樣本（抗原），酶標記物和樣品互相競爭包被抗體的結合點，形成酶標記的抗原 — 抗體復合物固定在微孔內，沒有吸附的酶標記物通過洗滌去除，加入底物溶液于微孔中，復合物上的酶催化底物使其水解、氧化還原成為 有色 的產(chǎn)物。 ? 在進行測定時首先將包被了抗體的酶標板的微孔分為測定孔和對照孔，在對照孔中加入系列標準品溶液和酶標記物；在測定孔中同時加入酶標記物和非酶標抗原（通常來自于待測樣品），酶標記物和樣品互相競爭包被抗體的結合點，經(jīng)過溫浴后，沒有結合到包被抗體上的酶標記物和樣品經(jīng)過洗滌去除。由于我公司的試劑盒產(chǎn)品絕大部分屬于直接法中的競爭法。前者稱為直接夾心法，后者稱為間接夾心法。見圖 217（ a） ? 間接法： ? 是將酶標記在二抗上，當抗體（一抗）和包被在酶標板的抗原結合形成復合后，再以酶標二抗和復合物結合，通過測定酶反應產(chǎn)物的顏色可以（間接）反應一抗和抗原的結合情況，進而計算出抗原或抗體的量。 ? 返回 ? 、 ELISA方法的分類 ? ELISA可以分為直接法、間接法和夾心法等幾種。在一定的條件下，復合物上酶的量（也反映了固定化的抗原抗體復合物的量）和酶產(chǎn)物呈現(xiàn)的色澤成正比，因此可以用分光光度計進行測定，從而計算出參與反應的抗原和抗體的量。目前市場上有多種基于 ELISA方法開發(fā)的用于食品中抗生素檢測的試劑盒產(chǎn)品。 ? 抗體 ：是由抗原刺激動物的免疫系統(tǒng)后，由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生分泌的能和相應抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白。酶聯(lián)免疫吸附測定法（ ELISA)在 抗生素殘留檢測中的應用 藥物殘留快速檢測試劑盒 實驗操作指導 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ ELISA）簡介 ? 、基本概念：抗原、抗體、抗原抗體的特性 ? 、 ELISA方法簡介： ? 、 ELISA方法的原理 ? 、 ELISA方法的分類 ELISA試劑的組成 ? 、 ELISA試劑盒的組成 ? 、已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑，俗稱酶標板）； 、酶標記的抗原或抗體（酶標記物）； 、酶的底物； 、參考標準品（定量測定）； 、酶標記物及樣本的稀釋液； 、洗滌液； 、酶反應終止液。 、各 ELISA組成試劑的作用 ? 、固相載體 ? 、免疫吸附劑 ? 、酶標記物 ? 、酶的底物 ? 、洗滌液 ? 、反應終止液 、參考標準品 ELISA實驗過程 ? 、試劑的準備 、加樣 、保溫 、 洗滌 、顯色和比色 ELISA試驗的質量控制 ? 、分析前質控 、人員培訓 、儀器質控 ? 、標本采集及處理過程的質控 ? 、分析中質控 、幾種常用的質控方法 ? 、灰區(qū)概念 、外添加回收率試驗方法 ? 、確證陽性樣品質控 ? 、室間質評的方法 ：發(fā)質控物進行調查 ? 膠體金試紙 ? 、免疫層析法簡介及特點 ? 、免疫層析法的結構及原理 ? 二、培訓內容（操作部分） ? 操作過程演示 ? 計算軟件應用說明 ? 酶聯(lián)免疫吸附測定法（ ELISA）簡介 ? 、基本概念： ? 抗原 ：抗原是指進入人或動物機體后，可刺激機體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應答，從而引起動物產(chǎn)生抗體或形成致敏淋巴細胞，并能和抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的物質。 ? 抗原抗體的基本特性： a、反應的特異性； b、反應的等比例性 ? 、 ELISA方法簡介： ? ELISA屬于標記免疫學技術的一種， 1971年由荷蘭和瑞典的學者提出，由于其操作過程簡單易行并可以定量，從而使其在食品安全和衛(wèi)生檢測中得到了廣泛的應用。 ? 返回 ? 、 ELISA方法的原理 ? 基于抗原抗體反應的特異性和等比例性，以 96孔的聚苯乙烯塑料微孔板（又稱酶標板）為載體，在適當?shù)募夹g條件下使抗原或抗體包被（吸附）在酶標板微孔的內壁上成為所謂的包被（固相）抗體或抗原，沒有被吸附（游離）的抗原或抗體通過洗滌除去，然后直接加入酶標記抗體或抗原（或先加入適當?shù)目贵w或抗原與包被抗原或抗體反應后，再加入相應的酶標記抗體或抗原），形成酶標記的抗原 — 抗體復合物固定在微孔內，沒有吸附的酶標記物洗滌去除，加入底物溶液于微孔中，復合物上的酶催化底物使其水解、氧化或還原成為有色的底物。這就是 ELISA的原理。 ? 直接法： ? 直接法是指酶標抗原或抗體直接與包被在酶標板上的抗體或抗原結合形成酶標抗原 — 抗體復合物，加入酶反應底物，測定產(chǎn)物的吸光值，計算出包被在酶標上的抗體或抗原的量。見圖 217（ b） ? 夾心法： ? 是先將未標記的抗體包被在酶標板上，用于捕獲抗原，在用酶標的抗體與抗原反應形成抗體 抗原 酶標抗體復合物；也可以象間接法一樣應用酶
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