【正文】 大作用 ,但不同得酶選用不同得底物．技疫免 ?術(shù)常用得酶及其底物 酶底物顯色反應(yīng)測定波長 *２ 94 色紅橘胺二苯鄰酶物化氧過根辣 ?四甲替聯(lián)苯胺黃色４６ 0＊ *９ 4４色棕酸楊水基氨 ?鄰聯(lián)苯甲胺蘭色4252， 2＇ — 連胺基 — ２ (３ 乙基 并噻唑啉磺酸 — 6）銨鹽藍(lán)綠色 64２Ｐ（鹽酸磷酚基硝－ 4 酶酯酸磷性堿 ?NＰ )黃色 400 萘酚 — AＳ — Mx磷酸鹽 +重氮鹽紅色 5００ +糖萄葡 ?024,504 色黃糖萄葡 +Ｐ RH+STBＡ酶化氧糖萄葡 ?甲硫酚嗪 +噻唑蘭深藍(lán)色 0５４， 06３光熒 )Ｇｕ M4（苷糖乳半基酮傘基甲酶苷糖乳半 Ｄ — β ? 硝基酚半乳糖苷 (ONＰ G)黃色 420 ?＊終止 劑為 2mｏ l/LH2ＳＯ４ **。 ↓ ?其余步驟同“雙抗體夾心法”得 ５、６。次日洗滌３次 .↓做時(shí)同 (。也可測 O?D 值 :在 ELISA 檢測儀上 ,于４５0nm（若以 ABTS 顯色，則 410nｍ )處 ,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔 O?D值，若大于規(guī)定得陰性對(duì)照 OD 值得２、 1倍，即為陽性。 、 5 ?終止反應(yīng) :于各反應(yīng)孔中加入 2Ｍ硫酸 0、０ 5ml。 37℃孵育 0、 5～ 1小時(shí)，洗滌。 加樣 :加一定稀釋得待檢樣品０、 1ml 于上述已包被之反應(yīng)孔中 ,置３７℃孵育１小時(shí) .然后洗滌。次日 ,棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗３次，每次 3 分鐘。 ? 基本方法一用于檢測未知抗原得雙抗體夾心法 :、 1 液沖緩被包鹽酸碳牰、 9HPＭ５ 0、 0 用：被包 ?將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為１ ~10μ g/ｍ l。 顯現(xiàn)微量得免疫沉淀反應(yīng)。因此 EＬＩ SＡ法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大 ,可概括四個(gè)方面： 免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份得定位。也已應(yīng)用于大分子抗原與小分子抗原得定量測定 ,根據(jù)已經(jīng)使用得結(jié)果，認(rèn)為 ELISA 法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn) .不僅適用于臨床標(biāo)本得檢查 ,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本 ,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。)3(酶 ?結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后 ,可根據(jù)加入底物得顏色反應(yīng)來判定就是否有免疫反應(yīng)得存在 ,而且顏色反應(yīng)得深淺就是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體得量成正比例得 ,因此 ,可以按底物顯色得程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。高純度 HRＰ得 RＺ值在３、 0 左右 ,最高可達(dá) 4.用于Ｅ LISA 檢測得 HRP 得 RZ 值要求在３、０以上 .):條三有理原本基得 ASILＥ ??1（就能可，面表體載相固于附吸地性理物以能體抗或原抗 ?是蛋白與聚苯乙烯表面間得疏水性部分相互吸附 ,并保持其免疫學(xué)活性 。酶得濃度與純度常以輔基得含量表示。常用于ＥＬ IＳ A 法得酶有辣根過氧化物酶 ,堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。待測抗體 (抗原 )得定量與有色產(chǎn)生成正比。elisa 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)報(bào)告（小編整理） 第一篇： elisa酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)報(bào)告 eｌ isａ酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)報(bào)告 得目驗(yàn)實(shí) .一??酶聯(lián)免疫吸附測定 (enzyme— linｋ edimmunｏ sorbeｎ tassay簡稱 EＬ ISA)就是在免疫酶技術(shù) (iｍ munoenzymatiｃｔ echniｑ uｅ s)得基礎(chǔ)上發(fā)展起來得一種新型得免疫測定技術(shù)，Ｅ LＩＳ A過程包括抗原 (抗體 )吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗體（抗原 )，再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體 (抗原） ,生成抗原（抗體 )－待測抗體 (抗原） －酶標(biāo)記抗體得復(fù)合物 ,再與該酶得底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)得光吸收計(jì)算抗體（抗原）得量。 理原驗(yàn)實(shí) .二 ?用于免疫酶技術(shù)得酶有很多，如過氧化物酶 ,堿性磷酸酯酶 ,β－ D－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶 ,6－磷酸葡萄糖脫氧酶等。由于酶摧化得就是氧化還原反應(yīng) ,在呈色后須立刻測定 ,否則空氣中得氧化作用使顏色加深 ,無法準(zhǔn)確地定量 .辣根過氧化物酶（ HＲ P）就是一種糖蛋白 ,每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素（ protoｎｈ eｍ iｎ）區(qū)作輔基。氯化血紅素輔基得最大吸收峰就是 40３ｎ m，HRP 酶蛋白得最大吸收峰就是 27５ nm，所以酶得濃度與純度計(jì)算式就是（已知 HＲ P得 A（１ cm4０ 3nm1%)＝２ 5，式中 1% 指Ｈ RP 百分濃度為 100mｌ含酶蛋白 1g，即 10mg/ｍｌ ,所以 ,酶濃度以 mg/mｌ計(jì)算就是Ｈ RP 得 A(１ cm403ｎ mmｇ／ｍ l= 5)Ｈ RP 純度（ＲＺ )=A403nm／ A275nm 純度 RZ（ Reiｎ heｉ tＺ ahl）值越大說明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。(2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物 ,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)與酶學(xué)活性 。 ELＩ SA 法就是免疫診斷中得一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起得傳染 病、寄生蟲病及非傳染病等方面得免疫診斷。本法不僅可以用來測定抗體 ,而且也可用于測定體液中得循環(huán)抗原，所以也就是一種早期診斷得良好方法。 研究抗酶抗體 得合成。 定量檢測體液中抗原或抗體成份。在每個(gè)聚苯乙烯板得反應(yīng)孔中加 0、 1ｍ l， 4℃過夜。（簡稱洗滌 ,下同 )。 (同時(shí)做空白孔 ,陰性對(duì)照孔及 陽性對(duì)照孔）．、３ 體抗標(biāo)酶得釋稀鮮新入加 ,中孔應(yīng)反各于 :體抗標(biāo)酶加 ?（經(jīng)滴定后得稀釋度） 0、 1ml。 ４、加底物液顯色 :于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制得 TMB底物溶液 0、1mｌ ,37℃１ 0～３ 0分鐘。 結(jié)果判定 :可于白色背景上 ,直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色得深淺 ,以“＋”、“ — ”號(hào)表示。 ?基本方法二用于檢測未知抗體得間接法 :、 0 加孔每，ｌ m／ｇμ０１～ 1 至釋稀原抗知已將液沖緩被包用 ?１ mｌ， 4℃過夜。滌洗，時(shí)小 1 育孵℃７ 3 置 ,中孔應(yīng)反之被包已述上于 lm 0)體抗知未 (品樣檢待得釋稀定一加 ? 空白、陰性及陽性孔對(duì)照） ↓ ?于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋得酶標(biāo)第二抗體（抗抗體 )０、 1mｌ ,37℃孵育 30— 60 分鐘 ,洗滌 ,最后一遍用 DDW洗滌。 (物底與酶）二 ??酶結(jié)合物就是酶與抗體或抗原 ,半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)得產(chǎn)物。劑止終得同不有物底得同不 ,酸檬檸 L/loｍ 2為劑止終 ?可催化下列反應(yīng)： Ｈ RＰ +Ｈ 2O2→復(fù)合物復(fù)合物 +Ａ H２→過氧化物酶 +H2Ｏ +Ａ AH2— 為無色底物 ,供氫體 。 (?法方種四得用常Ａ SILE)三 ??1．直接法測定抗原；面表體載在附吸原抗將 ?加酶標(biāo)抗體 ,形成抗原 — 抗體復(fù)合物 。間接法測定抗體；面表體載相固于附吸原抗將 ?加抗體，形成抗原 抗體復(fù)合物；加酶標(biāo)抗體 。量體抗 =量解降得物底定測 .物底加 ?3。面表相固于附吸體抗得得獲物動(dòng)種一第疫免原抗將 ?物 。量原抗 =量解降得物底。面表體載相固在附吸體抗將 ?原抗定測法爭競 ?)1(） 。?。物底加 ?三。 包被液 ::0、 05mol／ LpH９、 6碳酸緩沖液， 4℃，保存 ,Ｎ a２CO１ 5克，Ｎａ HＣ O２ 93 克 ,蒸餾水稀釋至 100ml。 、 6 同 :液滌洗 ?稀釋液 封閉液 :０、５ %雞卵清蛋白 ,pH 4PBS。 終止液 :2ｍ ol/Ｌ H2SO4。 、 2 將后最 ,次三復(fù)反 ,鐘分三放靜，液滌洗滿加，體液中孔板盡倒 :滌洗 ?反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。升微 002 孔每 ,，釋稀種幾作清血檢被將液釋稀用 :清血檢被加 ?放置 2 小時(shí)。 2 同滌洗 ?、 7。鐘分 51－ 01 處暗溫室 ,ｌ m0０ 2 加液溶胺二苯鄰 :物底加 ?加終止液 :每孔 50微升。 本指導(dǎo)原則系對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。 三、基 本要求 （一）基本原則 、生產(chǎn)用的各種原料、