[工學(xué)]色譜測(cè)定法-展示頁(yè)
2024-10-22 19:55本頁(yè)面
【正文】 色譜儀由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣 系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)等 五大部分組成。 ? 高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī) 定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行 分離測(cè)定的色譜方法。 ? 展開(kāi)可以單向展開(kāi)，即向一個(gè)方向進(jìn)行；也可進(jìn)行雙向展開(kāi)，即先向一個(gè)方向展開(kāi)，取出，俟展開(kāi)劑完全揮發(fā)后，將濾紙轉(zhuǎn)動(dòng) 90176。 (2)上行法點(diǎn)樣方法同下行法。展開(kāi)前，展開(kāi)缸內(nèi)用各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑的蒸氣使之飽和，一般可在展開(kāi)缸底部放一裝有規(guī)定溶劑的平皿或?qū)⒔幸?guī)定溶劑的濾紙條附著在展開(kāi)缸內(nèi)壁上，放置一定時(shí)間，俟溶劑揮發(fā)使缸內(nèi)充滿飽和蒸氣。用定量毛細(xì)管或微量注射器吸取溶液，點(diǎn)于點(diǎn)樣基線上，溶液宜分次點(diǎn)加，每次點(diǎn)加后，俟其自然干燥、低溫烘干或經(jīng)溫?zé)釟饬鞔蹈?，樣點(diǎn)直徑為 2～ 4mm，點(diǎn)間距離約為～ ，樣點(diǎn)通常應(yīng)為圓形。用于上行法時(shí) ， 色譜濾紙長(zhǎng)約 25cm， 寬度則按需要而定 ， 必要時(shí)可將色譜濾紙卷成筒形；點(diǎn)樣基線距底邊約 2. 5cm。 (3) 色譜濾紙應(yīng)質(zhì)地均勻平整 ， 具有一定機(jī)械強(qiáng)度 ， 不含影響展開(kāi)效果的雜質(zhì)；也不應(yīng)與所用顯色劑起作用 ， 以致影響分離和鑒別效果 ， 必要時(shí)可進(jìn)行處理后再用 。 ? 用于上行法時(shí)，在蓋上的孔中加塞，塞中插入玻璃懸鉤，以便將點(diǎn)樣后的色譜濾紙掛在鉤上；并除去溶劑槽和支架。 ? 用于下行法時(shí)，蓋上有孔，可插入分液 漏斗，用以加入展開(kāi)劑。 ? 作為藥品的含量測(cè)定時(shí)，將主色譜斑點(diǎn)剪下洗脫后，再用適宜的方法測(cè)定。 ? 作為藥品的鑒別時(shí)，供試品在色譜圖中所顯主斑點(diǎn)的位置與顏色 (或熒光 )，應(yīng)與對(duì)照品在色譜圖中所顯主斑點(diǎn)相同。供試品經(jīng)展開(kāi)后，可用比移值 (Rf)表示其各組成成分的位置 (比移值=原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離／原點(diǎn)中心至展開(kāi)劑前沿的距離 )。分離后各成分的檢出，應(yīng)采用各品種項(xiàng)下所規(guī)定的方法。所用溶劑應(yīng)與供試品不起化學(xué)反應(yīng)，純度要求較高。 ? 分子排阻色譜法 又稱凝膠色譜法，是利用被分離物質(zhì)分子大小的不同導(dǎo)致在填料上滲透程度不同使組分分離；常用的填料有葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，根據(jù)固定相和供試品的性質(zhì)選用水或有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。 ? 分配色譜 是利用被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的不同使組分分離，其中一相被涂布或鍵合在固體載體上，稱為固定相，另一相為液體或氣體，稱為流動(dòng)相；常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。色譜測(cè)定法 生物藥物分析測(cè)定方法 色譜測(cè)定法 ? 色譜法根據(jù)其分離原理可分為：吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法與排阻色譜法等。 ? 吸附色譜法 是利用被分離物質(zhì)在吸附劑上吸附能力的不同，用溶劑或氣體洗脫使組分分離；常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。 ? 離子交換色譜 是利用被分離物質(zhì)在離子交換劑（樹(shù)脂、凝膠）上交換能力的不同使組分分離；常用的交換劑有不同強(qiáng)度的陽(yáng)離子交換劑、陰離子交換劑，流動(dòng)相為水或含有機(jī)溶劑的緩沖液。 ? 色譜法又可根據(jù)分離方法分為：紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。分析時(shí)的溫度，除氣相色譜法或另有規(guī)定外，系指在室溫操作。 紙色譜法 ? 紙色譜法系以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)的分配色譜。但由于影響比移值的因素較多，因而一般采用在相同實(shí)驗(yàn)條件下與對(duì)照物質(zhì)對(duì)比以確定其異同。 ? 作為藥品的純度檢查時(shí)，可取一定量的供試品，經(jīng)展開(kāi)后，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)或呈色深度 (或熒光強(qiáng)度 )。 1．儀器與材料 (1) 展開(kāi)容器通常為
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