【正文】 k 脂肪酸鑒定系統(tǒng)共檢測出 20 種脂肪酸，主要脂肪酸類型為 15:0ISO 和 15:0 ANTEISO。序列經(jīng) Clustal X[9]對齊后，用軟件 Mega 4[10,11]進行聚類分析（方法為 NeighbourJoining，Nucleotide: JukesCantor） 。芽胞桿菌細胞脂肪酸的提取試劑和方法參照 MIDI 操作手冊 [8]（ Sherlock Microbial Identification System，Version ） 。 芽胞桿菌脂肪酸鑒定方法氣相色譜系統(tǒng)采用的是美國 Agilent 7890N 型，包括全自動進樣裝置、石英毛細管柱及氫火焰離子化檢測器；分析軟件應用美國 MIDI 公司開發(fā)的基于細菌細胞脂肪酸成分鑒定細菌的軟件Sherlock (microbial identification system )。PCR 反應條件：95 ℃預變性 45 s，94 ℃變性 15 s，58 ℃ 復性 30 s，72 ℃延伸 90 s，30 個循環(huán)，72 ℃ 延伸 10 min。PCR 擴增：PCR 擴增體系為 25 μL：10Buffer μL，dNTP Mixture （10 m M） μL，引物 F μL，引物 R μL，TaqDNA 酶() μL，DNA μL，ddw μL。供試菌株在TSB培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)24 h。本文比較了基于脂肪酸和 ITS 的兩種鑒定方法，主要目的是分析脂肪酸鑒定方法能否可以作為一種簡單、準確的芽胞桿菌的鑒定和分類方法。Alexandra 等 [6]利用脂肪酸成分對 Legionella 屬進行了數(shù)值分析，結(jié)果表明脂肪酸可以作為該屬分類的一個有效標記，能正確的將 Legionella 屬不同的種以不同的分支代表。Heyrman 等[4]（1999）用脂肪酸對從壁畫分離到的微生物進行分類，脂肪酸成分的分群充分表現(xiàn)了微生物的多樣性。Xu 等 [3]利用 ITS序列解釋了芽胞桿菌科 6 個屬 40 個種的系統(tǒng)發(fā)育關系，能準確的將芽胞桿菌近緣屬區(qū)分開來，但是，對于親緣關系極相近的一些種，ITS 序列不能準確區(qū)分。同時， Woese 證明了 RNA 可以作為微生物分類的一把標尺，Ash 等[2]利用 16S rRNA 將 51 種芽胞桿菌分為 5 群。因此研究芽胞桿菌分類具有重要的意義。 classification and identification芽胞桿菌是一大類表型特征不同的細菌群，如營養(yǎng)需求的多樣性，生理與代謝多樣性，DNA堿基范圍廣。 fatty acid。Email: 通訊作者：劉波，博士、研究員，從事生物技術與生物農(nóng)藥研究。關鍵詞：芽胞桿菌；脂肪酸類型；ITS 序列；分類Comparison of Bacillus species identification based on ITS and fatty acid analysisGuohong Liu1,2, Yingzhi Lin1, Bo Liu1（ 1Fujian Academy of Agricultural Sciences, 35003。枯草芽胞桿菌群主要脂肪酸 15:0ISO 的含量小于 15:0 ANTEISO，15:0ISO/15:0 ANTEISO 的比值為 1/32/3。巨大芽胞桿菌的 15:0ISO/15:0 ANTEISO 的比值為約 4/55/4，菌株 4500 為短小芽胞桿菌，其 15:0ISO/15:0 ANTEISO 比值約為 2。簡單芽胞桿菌群主要脂肪酸為 15:0 ANTEISO 和 15:0ISO， 15:0ISO/15:0 ANTEISO 比值約為 1/6 左右。本文選取芽胞桿菌三大類菌群主要特征性脂肪酸的含量比例（15:0ISO/15:0 ANTEISO）進行了分析。通過生物軟件 SPSS 和 Mega 分別對 16 株菌進行聚類分析，結(jié)果表明脂肪酸比 ITS 更適合于芽胞桿菌的分類研究，本根據(jù)脂肪酸成分可以將 16 株芽胞桿菌準確的聚在一起，而 ITS 則不能。目 錄芽胞桿菌種類脂肪酸鑒定與分子鑒定方法的比較 ..........................................................1福建茶園土壤菊酯類農(nóng)藥調(diào)查 .....................................................................................13柑橘木虱成蟲過冷卻點及結(jié) 冰點的測定(1 月份) ..........................................................19不同致病性青枯雷爾氏菌發(fā)酵液紫外掃描 ...................................................................23短短芽孢桿菌 FJAT0809GLX 的基因預測及基因 注釋 ..............................................28酶解后 BT、BTA 與小菜蛾 BBMVs 的相互作用的研究 ...............................................34漳州香蕉枯萎病株體內(nèi)細胞壁降解酶的比較 ...............................................................40芽胞桿菌種類脂肪酸鑒定與分子鑒定方法的比較劉國紅 1，2 ，林營志 1, 劉波 1（1 福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所，350003；2 福建農(nóng)林大學, 350002） 摘要：芽胞桿菌在自然界中分布廣泛，因此芽胞桿菌也具有悠久的研究歷史，但是其分類地位一直處于變化之中。為了尋找一種簡單快速的分類手段，本文基于 ITS 序列和脂肪酸鑒定方法對從土壤中分離得到的 16 株芽胞桿菌進行分類研究，與分子鑒定結(jié)果相比，脂肪酸種的鑒定準確率可達到 99%以上。芽胞桿菌特征性脂肪酸為 15:0 ANTEISO 和 15:0 ISO，但不同種芽胞桿菌的此類脂肪酸含量不同。其中比較特殊的為蠟狀芽胞桿菌類群，蠟狀芽胞桿菌主要脂肪酸為 15:0ISO，其次為 13:0ISO，而15:0 ANTEISO 的含量很低非主要類型，15:0ISO/15:0 ANTEISO 的比值約為 。巨大芽胞桿菌類群主要脂肪酸15:0ISO 和 15:0 ANTEISO 含量相近，其余脂肪酸遠遠低于這兩種主要脂肪酸。短小芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌脂歸為一類是因為其脂肪酸類型相近，但含量并不同。綜上所述，根據(jù)以上所述，芽胞桿菌主要脂肪酸含量和類型可以快速地初步判斷未知菌株屬于哪個類群，表明脂肪酸鑒定可以成為一種快速、有效、簡單的芽胞桿菌分類鑒定方法。 2 Fujian Agriculture and Forestry University, 350002）Abstract: Bacillus species are widely distributed in nature. Although the study of genus Bacillus has a long history, its taxonomic status has been in changes. In order to find out a simple and rapid means for identification, 16 strains of Bacillus species isolated from soil were studied based on ITS sequences and fatty acids analysis. FA Identification results accuracy rate was 99%. Through biological software of SPSS and Mega cluster analysis, fatty acids were found to be better for Bacillus identification than ITS sequences. In this paper, we could make all the strains cluster together, by FA, but ITS could not. The major fatty acid of genus Bacillus was 15:0 ANTEISO and 15:0 ISO, author analyzed the major FA ratio of three group. Bacillus cereus group was special, its major FA was 15:0ISO, and 13:0ISO，but 15:0 ANTEISO had very lower profile. The ratio of Bacillus cereus group major 資助項目： 國家 948 項目子專題：高效新型微生物資源引進與創(chuàng)新（2022G25） ；福建省科技項目公益專項：生物農(nóng)藥行業(yè)特色芽孢桿菌資源庫的建立及生防菌株的篩選應用（2022R100371） ；作者簡介：劉國紅，博士生，研究方向為微生物分類。電話：059187864601；Email: 收稿日期： ；接受日期： ；修回日期：FA was . The ratio of Bacillus simplex group was 1/6. The ratio of Bacillus megaterium was 4/52, having similar amount of two major FA, and the rest Fas were very lower. The profile of 15:0ISO was lower than 15:0 ANTEISO in Bacillus subtilis group, and ratio was 1/32/3. The conclusion was that we can preliminary judge unknown strains through fatty acid. So, it was showed that fatty acids can be a fast, effective and simple method of classification and identification of genus Bacillus.Keywords: Bacillus species。 ITS。芽胞桿菌種類繁多，功能多樣，在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學等各個領域都具有重要的作用。Priest 等 [1]根據(jù)芽胞桿菌的表型特征進行數(shù)值分類，從而將 368 株菌被分為 79 個群。但是，隨著分類技術的發(fā)展，發(fā)現(xiàn) 16S rRNA 過于保守，很難區(qū)分近緣種，而 rDNA 轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）彌補了 16S rRNA 的缺陷。脂肪酸是微生物細胞組分中一種穩(wěn)定而富有的重要成分，它和細菌的遺傳變異、毒力、耐藥性等有極為密切的關系，它的種類和含量是細胞化分類法的重要依據(jù)之一。Johannes[5]研究不同溫度下簡單芽胞桿菌脂肪酸的變化，分析了以色列進化谷中微生物的進化起源關系。王秋紅等 [7]利用氣相色譜技術檢測福建省 40 株青枯雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)菌株細胞內(nèi)的脂肪酸，分析發(fā)現(xiàn)其脂肪酸分布有明顯的多態(tài)性，脂肪酸有望成為青枯雷爾氏菌小種鑒定的新指標，但構建芽胞桿菌脂肪酸指數(shù)公式的研究還未見報道。1 材料與方法 供試菌株供試菌株：芽胞桿菌菌株4382， 4388， 4395，4396， 4399，4404，4428，4481 ，4469 ，4470，4476，4495，4500，4521， 4591，4540等16株從吉林、新疆、內(nèi)蒙古、甘肅、西藏、陜西等地采集分離得到（表1） ，保存于福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)生物資源研究所。表 1 芽胞桿菌的采樣地點和生境類型Table 1 The sampling locations and habitat types of Bacillus species序號 菌株編號 采樣地點 采樣生境 采集時間1. 4382 吉林長白山 天池土壤 202207302. 4388 吉林長白山 大峽谷林地土壤 202207303. 4395 吉林長白山 大峽谷林地土壤 202207304. 4396 吉林長白山 大峽谷林地土壤 202207305. 4399 新疆阜北農(nóng)場 戈壁雜草根際土 202210086. 4404 新疆阜北農(nóng)場 戈壁雜草根際土 202210087. 4428 新疆阜北農(nóng)場 戈壁白堿土 202210088. 4481 內(nèi)蒙古呼爾浩特 大草原根際土 202207319. 4469 內(nèi)蒙古響沙灣 沙漠土壤 20220731序號 菌株編號 采樣地點 采樣生境 采集時間10. 4470 內(nèi)蒙古響沙灣 沙漠土壤 2022073111. 4476 內(nèi)蒙古響沙灣 沙漠土壤 2022073112. 4495 內(nèi)蒙古呼爾浩特 大草原根際土 2022073113. 4500 甘肅蘭州 黃河底土 2022080414. 4521 西藏林芝 古柏根際土 2022070715. 4591 陜西省延安市寶塔山區(qū) 樹林土 2022051916. 4540 西藏林芝汞措湖 菜地 20220707 芽胞桿菌 ITS 分子鑒定方法