【正文】 或葉綠體失水收縮，將影響對(duì)葉綠體形態(tài)和分布的觀察。 四．方法步驟： 步 驟 注 意 問 題 分 析 6 1．制片。 若用菠菜葉作實(shí)驗(yàn)材料，要取菠菜葉的下表皮并稍帶些葉肉。 三．實(shí)驗(yàn)材料： 觀察葉綠體時(shí)選用：蘚類的葉、黑藻的葉。 線粒體辨認(rèn)依據(jù)：線粒體的形態(tài)多樣，有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等。 實(shí)驗(yàn)四 用高倍鏡觀察線粒體和葉綠體 （必修一 P47） 一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 使用高倍鏡觀察葉綠體和線粒體的形 態(tài)分布。 各種細(xì)胞之間的差異和產(chǎn)生差異的可能原因是：這些細(xì)胞的位置和功能不同，其結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)，這是個(gè)體發(fā)育過程中細(xì)胞分化產(chǎn)生的差異。 （ 2）轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，用高倍鏡觀察，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到看清楚材料為止。 第四步：觀察并用細(xì)胞準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦。用高倍鏡觀察，只需微調(diào)即可。因此，需要先用低倍鏡觀察清楚，并把要放大觀察的物像移至視野的中央，再換高倍鏡觀察。 三．方法步驟： 第一步：轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡使視野明亮 第二步：在低倍鏡下觀察清楚后，把 要放大觀察的物像移至視野中央 第三步：用轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)過高倍物鏡 問（ 1）是低倍鏡還是高倍鏡的視野大，視野明亮？為什么？ 提示：低倍鏡的視野大，通過的光多，放大的倍數(shù)?。桓弑剁R視野小，通過的光少，但放大的倍數(shù)高。 附：淀 粉的檢測和觀察 用試管取 2ml 待測組織樣液，向試管內(nèi)滴加 2 滴碘液，觀察顏色變化。 蛋清要先稀釋。 否則 CuSO4 的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色。 先加 NaOH 溶液，為 Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。鑒定時(shí)先加 A 液后加B 液。加樣液約 2ml 于試管中，加入 雙縮脲試劑 A，搖勻；再加入雙縮脲試劑 B 液 3~4滴，搖勻，溶液變紫色。） 黃豆浸泡 1 至 2 天，容易研磨成漿，也可購新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 三、蛋白質(zhì)的鑒定 操 作 方 法 注 意 問 題 解 釋 制備組織樣液。 裝片不宜久放。 滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣泡。同時(shí)，酒精是脂溶性溶劑，可將花生細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。 用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 在子葉薄片上滴 2~3滴蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液，染色 1 分鐘。 因?yàn)榻輹r(shí)間短，不易切片，浸泡時(shí)間過長，組織較軟，切下的薄片不易成形。 管，造成燙傷； （二）脂肪的鑒定 操 作 方 法 注 意 問 題 解 釋 花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。 斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙液混合保存時(shí)，生成的 Cu ( OH ) 2 在 70~900C 下分解成黑色 CuO 和水； 甲、乙液分別加入時(shí)可能會(huì)與組織樣液發(fā)生反應(yīng)，無Cu ( OH ) 2 生成。 3. 向試管內(nèi)注入 1mL 新制的斐林試劑，振蕩。 因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。 五、方法步驟： （一）可溶性糖的鑒定 操 作 方 法 注 意 問 題 解 釋 1. 制備組織樣液。 3．做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。） 2．做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。） 三．實(shí)驗(yàn)材料 1．做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。 3．蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。 2．脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色（或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色）。 1．可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的 Cu 2O 沉淀。 2．鹽酸能夠改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，同時(shí)使染色休中的 DNA 和蛋白質(zhì)分離，有利于DNA 與染色劑結(jié)合。 實(shí)驗(yàn)一 觀察 DNA、 RNA 在細(xì)胞中的分布 （必修一 P26） 一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模撼醪秸莆沼^察 DNA 和 RNA 在細(xì)胞中分布的方法 二．實(shí)驗(yàn)原理： 1．甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對(duì) DNA 和 RNA 的親和力不同，甲基綠使 DNA 呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使 RNA呈現(xiàn)紅色。使用完畢后，取下裝片，轉(zhuǎn)動(dòng)鏡頭轉(zhuǎn)換器，逆時(shí)針旋出物鏡，旋進(jìn)鏡頭盒；取出目鏡，插進(jìn)鏡頭盒，蓋上。（原因：物像移動(dòng)的方向和實(shí)際移動(dòng)玻片的方 向相反） 6．污點(diǎn)判斷： 1）污點(diǎn)隨載玻片的移動(dòng)而移動(dòng)，則位于載玻片上； 2）污點(diǎn)不隨載玻片移動(dòng)，換目鏡后消失，則位于目鏡；換物鏡后消失，則位于物鏡； 3）污點(diǎn)不隨載玻片移動(dòng)，換鏡后也不消失，則位于反光鏡上。 故裝片不能反放。 順序：移裝片→轉(zhuǎn)動(dòng)鏡頭轉(zhuǎn)換器→調(diào)反光鏡或光圈→調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋 注：換高倍物鏡時(shí)只能移動(dòng)轉(zhuǎn)換器，換鏡后，只準(zhǔn)調(diào)節(jié)細(xì) 準(zhǔn)焦和反光鏡（或光圈）。側(cè)面觀察降鏡筒→左眼觀察找物像→細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)清晰 4．高倍鏡的轉(zhuǎn)換。（找不到物像時(shí)，可重復(fù)一次或移動(dòng)裝片使標(biāo)本移至通光孔中心）。將切片或裝片放在載物臺(tái)上，標(biāo)本正對(duì)通光孔中心。調(diào)節(jié)視野亮度只可用遮光器和反光鏡，光線過強(qiáng)，改用較小光圈或用平面反光鏡；光線過弱，改用較大光圈或用凹面反光鏡。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，選取較大光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。 二、顯微鏡的使用 ：置鏡（裝鏡頭）→對(duì)光→置片→調(diào)焦→觀察 2 1． 安放。 呈像原理：映入眼球內(nèi)的是倒立放大的虛像。 一、光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)、呈像原理、放大倍數(shù)計(jì)算方法 結(jié)構(gòu)： 光學(xué)部分：目鏡、鏡筒、物鏡、遮光器（有大小光圈）和反光鏡（有平面鏡和凹面鏡） 機(jī)械部分：鏡座、傾斜關(guān)節(jié)、鏡臂、載物臺(tái)（上有通光孔、壓片夾）、鏡頭轉(zhuǎn)換器、粗、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。 1（人教版新課標(biāo)） 考綱要求 ：理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用。 補(bǔ)初中實(shí)驗(yàn)：認(rèn)識(shí)顯微鏡的結(jié)構(gòu)，學(xué)會(huì)使用顯微鏡 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫J(rèn)識(shí)顯微鏡的結(jié)構(gòu)，初步掌握使用顯微鏡的方法。 注 意 ：目鏡無旋轉(zhuǎn)螺絲，鏡頭越長，放大倍數(shù)越小；物鏡有旋轉(zhuǎn)螺絲，鏡頭越長，放大倍數(shù)越大。（物鏡質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響成像的清晰程度） 放大倍數(shù)：目鏡和物鏡二者放大倍數(shù)的乘積） 注：顯微鏡放大倍數(shù)是指直徑倍數(shù)，即長度和寬度，而不是面積。顯微鏡放置在桌前略偏左，距桌緣 8— 10cm 處，裝好物鏡和目鏡（目鏡 5 物鏡 10） 2．對(duì)光。左眼注視目鏡，同時(shí)把反光鏡轉(zhuǎn)向光源，直至視野光亮均勻適度。選低倍鏡→選較大的光圈→選反光鏡（左眼觀察） 3．觀察。轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋（順時(shí)針），俯首側(cè)視鏡筒慢慢下降，直到物鏡接近切片（約 ），左 眼觀察目鏡，（反時(shí)針）旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒慢慢上升，看到物像時(shí)輕微來回旋轉(zhuǎn)細(xì)準(zhǔn)焦，直到物像清晰。．觀察時(shí)兩眼都要睜開，便于左眼觀察，右眼看著畫圖。找到物像后，把要觀察的物像移到視野中央，把低倍鏡移走，換上高倍鏡，只準(zhǔn)用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整清晰，直到物像清楚為止。 問 1：低倍鏡換為高倍鏡后，若看不到或看不清原來的像，可能原因？（ ABC） A、物像不在視野中 B、焦距不在同一平面 C、載玻片放反，蓋玻片在下面 D、未換目鏡 問 2：放大倍數(shù)與視野的關(guān)系： 放大倍數(shù)越小，視野范圍越大，看到的細(xì)胞數(shù)目越多，視野越亮，工作距離越長； 放大倍數(shù)越大，視野范圍越小，看到的細(xì)胞數(shù)目越少，視野越暗，工作距離越短。 5．裝片的制作和移動(dòng)：制作：滴清水→放材料→蓋片 移動(dòng)：物像在何方，就將載玻片向何處移。 7．完畢工作。把顯微鏡放正。利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細(xì)胞染色，可以顯示 DNA 和 RNA 在細(xì)胞中的分布。 三．方法步驟： 操作步驟 注意問題 解釋 取口腔上皮細(xì)胞制片 載玻片要潔凈， 滴一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 %的 NaCl 溶液 用消毒牙簽在自己漱凈的口腔內(nèi)側(cè)壁上輕刮幾下取細(xì)胞 將載玻片在酒精燈下烘干 防止污跡干擾觀察效果 保持細(xì)胞原有形態(tài) 消毒為防止感染，漱口避免取材失敗 固定裝片 （細(xì)胞已死亡） 水解 將烘干的載玻片放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 8%的鹽酸溶液中，用 300C水浴保溫 5min 改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，促進(jìn)染色體的 DNA 與蛋白 3 質(zhì)分離而被染色 沖冼涂片 用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片 10S 洗去殘留在外的鹽酸 染色 滴 2 滴吡羅紅甲綠染色劑于載玻片上染色 5min 兩種溶液混合，現(xiàn)配現(xiàn)用 觀察 先低倍鏡觀察，選擇染色均勻、色澤淺的區(qū)域，移至視野中央，調(diào)節(jié)清晰后才換用高倍物鏡觀察 使觀察效果最佳 實(shí)驗(yàn)二 檢測生物組織中 的糖類、脂肪和蛋白質(zhì) （必修一 P18） 一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 嘗試用化學(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì) 二．實(shí)驗(yàn)原理：某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。如： 加熱 葡萄糖 + Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（磚紅色） + H 2O，即 Cu ( OH ) 2 被還原成 Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。淀粉遇碘變藍(lán)色。（蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性 NaOH 溶液中能與 雙縮脲試劑中的 Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。（因?yàn)榻M織的顏色較淺，易于觀察。應(yīng)選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡 3~4 小時(shí)（也可用蓖麻種子）。 四、實(shí)驗(yàn)試劑 斐林試劑（包括甲液：質(zhì)量濃度為 ：質(zhì)量濃度為 ）、蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液、雙縮脲試劑（包括 A 液：質(zhì)量 濃度為 ：質(zhì)量濃度為 CuSO4 溶液）、體積分?jǐn)?shù)為 50%的酒精溶液，碘液、蒸餾水。 （去皮、切塊、研磨、過濾） 蘋果或梨組織液必須臨時(shí)制備。 2. 取 1 支試管，向試管內(nèi)注入 2mL 組織樣液。 應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲(chǔ) 存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑； 切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢測。 4. 試管放在盛有 50650C 溫 最好用試管夾夾住試管上部，使 防止試管內(nèi)的溶液沖出試 4 水的大燒杯中，加熱約 2 分鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)色 → 棕色 → 磚紅色（沉淀） 試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向?qū)嶒?yàn)者。 干種子要浸泡 3~4 小時(shí)，新花生的浸泡時(shí)間可縮短。切片要盡可能薄些，便于觀察。 染色時(shí)間不宜過長。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，會(huì)影響對(duì)橘黃色脂肪滴的觀察。 用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上1~2 滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。 低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細(xì)胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。 時(shí)間一長，油滴會(huì)溶解在乙醇中。 （浸泡、去皮