【正文】 的問題，在振搖時容易引起破損及漏液，又因溶劑消耗量大，振搖過程中又易于乳化，故現(xiàn)在已很少應(yīng)用，多改用其它裝置。已知 PC的原理與液 液萃取法基本相同， Rf值與分配系數(shù) K之間有下列關(guān)系： 32 33 r為紙層色譜定數(shù)。一般 β50時，簡單萃取即可解決問題，但 β50時，則宜采用逆流分溶法。若加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┰趶?qiáng)烈的攪拌下，油被分散在水中，形成乳狀液，該過程叫乳化。易于乳化的萃取溶劑系統(tǒng)也不宜采用。另外，溶質(zhì)濃度越低，分離效果越好。此時簡單萃取已不能滿足需要，而要采用逆流分溶法(counter current distribution，簡稱 CCD)。當(dāng)向這種溶液中加入一定量的強(qiáng)酸時， H 離子基本上被 A離子消耗： 緩沖溶液的 pH值幾乎不變； 當(dāng)加入一定量強(qiáng)堿時，溶液中存在的弱酸 HA消耗 OH離子而阻礙 pH的變化。H 2O與 NH4Cl）等都是緩沖溶液。 23 緩沖液： 當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時，有阻礙溶液 pH變化的作用，稱為緩沖作用，這樣的溶液叫做緩沖溶液。 一般 pH3時，酸性物質(zhì)多呈非離解狀態(tài)(HA)、堿性物質(zhì)則呈離解狀態(tài) (BH+)存在；但 pH12，則酸性物質(zhì)呈離解狀態(tài) (A)、堿性物質(zhì)則呈非離解狀態(tài) (B)存在。 若使該酸性物質(zhì)完全離解 ， 即使 HA均轉(zhuǎn)變成 A一 則： 故： 21 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 因?yàn)榉宇惢衔锏?pKa值一般為 9． 2～10． 8，羧酸類化合物的 pKa值約為 5，故pH3 以下大部分酚酸性物質(zhì)將以非離解形式 (HA)存在，易分配于有機(jī)溶劑中；而pH12以上時，則將以離解形式 (A一 )存在，易分配于水中。以酸性物質(zhì) (HA)為例，其在水中的離解平衡及離解常數(shù) K可用下式表示： 19 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 兩邊取負(fù)對數(shù)則： 20 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 Ka及 pKa均可用來表示酸性物質(zhì)的酸性強(qiáng)弱 。 18 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 3．分配比與 pH 對酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物來說，分配比還受溶劑系統(tǒng) pH的影響。 17 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 就一般情況而言， β≥100，僅作一次簡單萃取就可實(shí)現(xiàn)基本分離；但 100β≥10，則需萃取 10～ 12次； β≤2時，要想實(shí)現(xiàn)基本分離，須作 100次以上萃取才能完成；β≌ 1 時，則 KA≌ KB，意味著兩者性質(zhì)極其相近，即使作任意次分配也無法實(shí)現(xiàn)分離。分離因子 β可定義為 A、 B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值。這說明，在上述條件下， A、 B兩種溶質(zhì)在氯仿及水中僅作一次分配就可實(shí)現(xiàn) 90％的分離。同理， KB==1／ 1 0，在振搖平衡后，則溶質(zhì) B的分配將與 A相反。 此時如果其中含有溶質(zhì) ， 則溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 (K)在一定的溫度及壓力下為一常數(shù) ，可以用下式表示： 15 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 K：表示分配系數(shù)； CU ：表示溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度； C L：表示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。 如雷氏銨鹽能與水溶性生物堿類生成沉淀 ， 可用于分離水溶性生物堿與其它生物堿；膽甾醇能和甾體皂苷沉淀 ， 可使其與三萜皂苷分離；明膠能沉淀鞣質(zhì) ， 可用于分離或除去鞣質(zhì)等 。如沉淀為雜質(zhì)，則可棄去；如沉淀為所要成分，則可將沉淀懸浮于水或稀醇中，通 H2S氣體或加入稀H2SO Na2SO4等脫鉛，成分即可分離。 11 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 鉛鹽沉淀法： 利用中性醋酸鉛或堿式醋酸鉛在水或稀醇溶液中能與許多物質(zhì)生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀而分離的方法。 酸提堿沉法（使生物堿類成分沉淀）。 40%～ 50%的乙醇可提取強(qiáng)心甙、鞣質(zhì)、蒽醌及其甙、苦味質(zhì)等； 60%～ 70%乙醇可提取甙類；更高濃度乙醇則可用于生物堿、揮發(fā)油、樹脂和葉綠素的提取。 8 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 醇提水沉法系指將中藥原料用一定濃度的乙醇用滲漉法、回流法提取，即可提取出生物堿及其鹽、甙類、揮發(fā)油及有機(jī)酸類等；雖然多糖類、蛋白質(zhì)、淀粉等無效成分不易溶出，但樹脂、油脂、色素等雜質(zhì)卻仍可提出。當(dāng)乙醇濃度達(dá)到 60%～70%時，除鞣質(zhì)、樹脂等外，其他雜質(zhì)已基本上沉淀而除去。如：水提醇沉法（除去多糖或蛋白質(zhì)）；醇提水沉法（除去樹脂或葉綠素）；醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法（使皂苷沉淀析出） 7 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 水提醇沉法系指處方中藥材加水煎煮，既提取出有效成分，如：生物堿鹽、甙類、有機(jī)酸類、氨基酸、多糖類等；同時也提出一些水溶性雜質(zhì)，如：淀粉、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、色素、無機(jī)鹽等。 6 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 （溶劑沉淀法） 在溶液中加入另一種溶劑以改變混合的極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出。 4 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 結(jié)晶和重結(jié)晶操作： 提取或分離物 ↓ 溶于選擇的溶劑 ， 加熱成飽和溶液 ， 過濾 溶液 ↓ 放置 （ 冷藏 ） 析晶 ， 過濾 粗結(jié)晶 ↓ 重復(fù)上述操作 （ 重結(jié)晶 ） 結(jié)晶 5 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 選擇結(jié)晶溶劑的原則是： 對要結(jié)晶的成分熱時溶解度大，冷時溶解度小，對雜質(zhì)冷熱都不溶或冷熱都易溶； 另外要求結(jié)晶溶劑不與待結(jié)晶物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)； 沸點(diǎn)較低、易揮發(fā)； 無毒或毒性很小。 （ 3） TLC或 PC分別用三種以上溶劑系統(tǒng)檢識，同單一圓整斑點(diǎn)。 （ 1）晶型均一，色澤均勻。 二者從操作角度差別是起始物不同 。 關(guān)于結(jié)晶和重結(jié)晶概念：結(jié)晶是指由非結(jié)晶狀態(tài)到形成結(jié)晶的操作過程 。 物質(zhì)分離的許多操作往往在溶液中進(jìn)行 。1 本節(jié)介紹中藥化學(xué)成分的一般分離方法 ， 有萃取 、 沉淀 、 結(jié)晶 、 色譜等方法 。 重點(diǎn)掌握中草藥有效成分分離方法的原理及規(guī)律 。 實(shí)踐中可以采用下列方法： 2 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 利用不同溫度可引起物質(zhì)溶解度改變的性質(zhì)來分離物質(zhì)。 重結(jié)晶指由純度低結(jié)晶處理成純度高結(jié)晶的操作過程 。 3 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 判斷結(jié)晶純度的方法。 （ 2）有一定的熔點(diǎn)和較小的熔距，熔距應(yīng)在 2度以內(nèi)。 （ 4） HPLC或 GC檢查呈現(xiàn)單峰。 選擇溶劑依據(jù) “ 相似相溶 ” 原理。從而實(shí)現(xiàn)分離。若往水煎液中加入適量乙醇，可以改變其溶解性能而將雜質(zhì)部分或全部除去。如果分 2～ 3次加入乙醇，濃度又逐步提高，最終達(dá)到 75%～ 80%，則除去雜質(zhì)的效果更好。為此，醇提取液經(jīng)回收乙醇后，再加水處理，并冷藏一定時間，可使雜質(zhì)沉淀而除去。 9 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 ： 對酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物來說，?？赏ㄟ^加入酸、堿以調(diào)節(jié)溶液的 pH值，改變分子的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變?nèi)芙舛榷鴮?shí)現(xiàn)分離。堿提酸沉法（使黃酮、蒽醌等沉淀）；等電點(diǎn)法（使蛋白質(zhì)沉淀） 10 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 ： 酸性或堿性化合物還可通過加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性的鹽類等沉淀析出。中性醋酸鉛可沉淀具有鄰二酚羥基和羧基的成分；堿式醋酸鉛的沉淀范圍較廣，可沉淀含酚羥基和羧基及中性皂苷等。 12 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離 專屬試劑沉淀法 : 某些試劑能選擇性地沉淀某類成分 ， 稱為專屬試劑沉淀法 。 13 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 常見的方法有 : 簡單的液．液萃取法、 逆流分溶法 (CCD)、 液滴逆流色譜法 (DCCC)、 高速逆流色譜 (HSCCC). 14 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 1． 液一液萃取與分配系數(shù) K值 將兩種相互不能任意混溶的溶劑 (例如氯仿與水 )置分液漏斗中充分振搖 ， 放置后即可分成兩相 。 現(xiàn)在假定有 A、 B兩種溶質(zhì)用氯仿及水進(jìn)行分配，如 A、 B的重量均為 ， KA=10， KB=，兩相溶劑體積比 VCHCl3／ VH20=1，則用分液漏斗作一次振搖分配平衡后，約 90％的溶質(zhì) A將分配在上相溶劑 (水 )中，約 10％的溶質(zhì) A則分配到下相溶劑(氯仿 )中。留在水中的約為10％，約 90％分配在氯仿中。 16 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 2．分離難易與分離因子 β 現(xiàn)在，我們可以用分離因子 β值來表示分離的難易。 即： 上例中， β=KA／ KB=10／ =100。而實(shí)際分離工作中，我們總是希望選擇分離因子 β值大的溶劑系統(tǒng)，以求簡化分離過程，提高分離效率。因?yàn)?pH變化可以改變它們的存在狀態(tài)(游離型或離解型 )，從而影響在溶劑系統(tǒng)中的分配比。酸性越強(qiáng) ， Ka越大 ， pKa值越小 。 22 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 我們也可以由文獻(xiàn)上給出的 pKa值求出各堿性物質(zhì)呈游離型或離解型時的 pH條件。據(jù)此，可采用下圖所示在不同 pH的緩沖溶液與有機(jī)溶劑中進(jìn)行分配的方法，使酸性、堿性、中性及兩性物質(zhì)得以分離。弱酸及其鹽的混合溶液（如 HAc與 NaAc），弱堿及其鹽的混合溶液（如 NH3 緩沖溶液作用原理和 pH值 由弱酸 HA及其鹽 NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用，是由于溶液中存在足夠量的堿 A的緣故。 24 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 利用 pH梯度萃取分離物質(zhì)的模式圖 25 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 4．逆流分溶法 (CCD) 液一液萃取分離中經(jīng)常遇到的情況是分離因子 β值較小，故萃取及轉(zhuǎn)移操作常須進(jìn)行幾十次乃至幾百次。 26 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 CCD法的分離過程示意圖 27 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 Craig逆流分溶儀萃取單元 28 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 逆流分溶儀萃取單元的工作過程 29 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 CCD法因?yàn)椴僮鳁l件溫和、試樣容易回收，故特別適于中等極性、不穩(wěn)定物質(zhì)的分離。但是，試樣極性過大或過小，或分配系數(shù)受濃度或溫度影響過大時則不易采用此法分離。 30 ? 乳化的概念： 乳化是液 液界面現(xiàn)象，兩種不相溶的液體，如油與水，在容器中分成兩層，密度小的油在上層，密度大的水在下層。（如果發(fā)生乳化，難以分離） （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 31 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 5．液一液萃取與紙色譜 分離因子 β是液．液萃取時判斷物質(zhì)分離難易的重要參數(shù)。問題是對于未知成分組成的混合物來說，不知道混合物中各個組分在同一溶劑系統(tǒng)中的分配比又如何求得 β值呢 ?這里可以借助紙色譜 (PC)的幫助。當(dāng)色譜濾紙濕重 (W濕 )為干重 (W干 )的 1． 5倍時， r=2。如將兩相溶劑中的一相涂覆在硅膠等多孔載體上，作為固定相，填充在色譜管中，然后加入與固定相不相混溶的另一相溶劑 (流動相 )沖洗色譜柱。這種方法稱之為液．液分配柱色譜法。通常，分離水溶性或極性較大的成分如生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物時，固定相多采用強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖溶液等，流動相則用氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑，稱之為 正相色譜 ；但當(dāng)分離脂溶性化合物，如高級脂肪酸、油脂、游離甾體等時，則兩相可以顛倒，固定相可用石蠟油，而流動相則用水或甲醇等強(qiáng)極性溶劑，故稱之為 反相分配色譜(reverse phase partition chromatography)。因此液．液分配柱色譜的最佳分離條件可以根據(jù)相應(yīng)的薄層色譜結(jié)果 (正相柱用正相板，反相柱用反相板 )進(jìn)行選定。 38 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 根據(jù)烴基 (R)長度為乙基 (C2H5)還是辛基 (C8H17)或十八烷基 (C18 H37)，分別命名為 RP(reverse phase) RP8及 RP18。 39 （二 )根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離 (2)加壓液相柱色譜： 經(jīng)典的液一液分配柱色譜中用的載體 (如硅膠 )顆粒直徑較大 (1OO～ 150 μm