種子制備ppt課件-展示頁
2025-05-14 22:48本頁面
【正文】 到受體細(xì)胞內(nèi) 。由于這兩種 DNA是用同一種限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行處理，具有相同的粘性末端，因此相互之間能夠形成氫鍵，這就是所謂 “ 退火 ” 。 對作為載體的細(xì)菌質(zhì)粒或噬菌體 DNA可采用與處理目的基因同一種類的限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行處理 ， 使其形成并暴露出與目的基因相應(yīng)的粘性末端 。 ⑵ 處理目的基因 在從供體細(xì)胞中提取出的目的基因中加入專一性很強(qiáng)的限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行處理 ， 從而獲得帶有特定基因并暴露出粘性末端的 DNA單鏈部分 。 第二章 種子制備 生化工藝 34 基本程序 ⑴ 含目的基因 DNA片段的制備； ⑵ 選擇合適的載體； ⑶ 帶有目的基因的 DNA片段與載體在體外連接； ⑷ 將重組的 DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞 ， 在受體細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增； ⑸ 篩選出帶有重組 DNA分子的轉(zhuǎn)化細(xì)胞； ⑹ 表達(dá) 、 鑒定外源基因的表達(dá)產(chǎn)物 。 由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進(jìn)行。 被照射的菌懸液細(xì)胞數(shù)，細(xì)菌為 106個／ ml左右，霉菌孢子和酵母細(xì)胞為106～ 107個／ ml。 第二章 種子制備 生化工藝 32 紫外線的誘變育種 紫外線誘變一般采用 15W紫外線殺菌燈 ， 波長為 2537A． 燈與處理物的距離為 15～ 30cm， 照射時間依菌種而異 ， 一般為幾秒至幾十分鐘 。 在數(shù)量減少后就要仔細(xì)比較參加復(fù)篩和再復(fù)篩的菌株 ， 最后才能選得優(yōu)秀菌株 。 復(fù)篩則是精選 ， 以質(zhì)為主 ， 也就是以精確度為主 。 第二章 種子制備 生化工藝 31 分離和篩選 篩選分初篩和復(fù)篩 。 第二章 種子制備 生化工藝 27 誘變的基本原理 誘變劑 物理誘變劑 紫外線 、 X— 射線 、 γ — 射線 ， 快中子 化學(xué)誘變劑 亞硝酸 、 烷化劑 生物誘變劑 噬菌體 誘變機(jī)理 ①物理誘變劑 紫外線：形成胸腺嘧啶二聚體 ②化學(xué)誘變劑 堿基突變、染色體畸變 第二章 種子制備 生化工藝 28 ? 誘變育種步驟 ? 出發(fā)菌株的選擇 ? 處理菌懸液的制備 ? 誘變處理 ? 中間培養(yǎng) ? 分離和篩選 關(guān)鍵是制備單細(xì)胞和單孢子狀態(tài)的、活力類似的菌懸液 第二章 種子制備 生化工藝 29 確定出發(fā)菌株 ↓ 菌種的純化選優(yōu) ↓← 出發(fā)菌株的性能鑒定 同步培養(yǎng) ↓ 制備單細(xì)胞（或單孢子）懸液 ↓← 活菌濃度測定 誘變劑的選擇與確定誘變劑量的預(yù)試驗 ↓ 誘變處理 ↓ 平板分離 ↓ 計形態(tài)變異的菌落數(shù)，計算突變率 挑取疑似突變菌落純培養(yǎng) ↓ 突變體的初步篩選 ↓← 用簡單快捷的方法 重復(fù)篩選 ↓← 搖瓶發(fā)酵試驗 選出突變體（根據(jù)情況進(jìn)行生產(chǎn)試驗或重復(fù)誘變處理） 第二章 種子制備 生化工藝 30 中間培養(yǎng) 處理方法： 讓變異處理后細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)幾小時 ，以讓細(xì)胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制 ， 讓細(xì)胞繁殖幾代 ， 以得到純的變異細(xì)胞 。土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、紅霉素 生化工藝 第二節(jié) 菌種的選育 把菌種制備成單孢子懸浮液，經(jīng)過適當(dāng)?shù)南? 釋以后，在固體平板上進(jìn)行分離，挑取部分 單菌落進(jìn)行生產(chǎn)能力的測定，經(jīng)反復(fù)篩選， 以確定生產(chǎn)能力更高的菌株代替原來的菌株 第二章 種子制備 生化工藝 24 自然選育的一般步驟 表現(xiàn)形態(tài) 目的代謝產(chǎn)物產(chǎn)量 遺傳基因型純度 傳代穩(wěn)定性 第二章 種子制備 生化工藝 25 從自然界中分離篩選菌種的方法步驟 采 樣 增殖培養(yǎng) 純種分離 純 培 養(yǎng) 生產(chǎn)性能測定 方法、地點、時間和周圍環(huán)境記錄 純種分離的原則就是使培養(yǎng)物獲得單個菌落： 1．稀釋分離法 2．平板劃線分離法 ⑴ 涂菌： ⑵ 劃線分離： ①分步劃線法；②一次劃線法： 3．組織分離法 測定代謝產(chǎn)物或其它目的性狀 第二章 種子制備 生化工藝 26 指用人
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