【正文】 了采集的血標本量，裂解 離心法可進行菌落計數(shù)定量分析。大多數(shù)播散性分枝桿菌感染是由鳥分枝桿菌復(fù)合體引起，通常出現(xiàn)于 CD4 細胞 100／ mm3 的 AIDS 患者。如儀器報陰，應(yīng)轉(zhuǎn)種巧克力 /血平板，某些特殊致病菌培養(yǎng)時間需延長，詳見 附錄。同時記錄報告的日期，時間，內(nèi)容以及接受報告人的姓名。 六、結(jié)果報告 1．陽性結(jié)果報告 初級報告：陽性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報告給醫(yī)生，包括：革蘭染色特性和形態(tài)，血培養(yǎng)陽性的瓶數(shù)和其它的鑒定信息 (如 革蘭陽性球菌疑似為葡萄球菌等 )。 革蘭染色為形態(tài)均一的細菌，根據(jù)革蘭染色結(jié)果選擇抗菌藥物進行直接抗菌藥物敏感試驗，同時轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)菌落，立即作細菌鑒定和標準抗菌藥物敏感 試驗。 ☆有條件者選種。 b 增加真菌培養(yǎng)基 (如：沙保弱葡萄糖瓊脂 )和 30℃孵育； c：接種硫羥乙酸鹽肉湯中。 發(fā)現(xiàn)細菌生長信號，應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物，涂片行革蘭染色，發(fā)現(xiàn)細菌，盡快報告染色結(jié)果；根據(jù)染色特征，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，見表 1。 2．試劑： 自配血培養(yǎng)瓶、血平板、麥康凱培養(yǎng)基、沙保氏培養(yǎng)基 五、實驗室檢查 1．血培養(yǎng)操作過程中應(yīng)注意生物安全防護。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告標本不合格的具體理由，建議補做血培養(yǎng)。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告拒收的具體理由。如發(fā)現(xiàn)可視信號提示有微生物生長，應(yīng)該立即直接涂片鏡檢和劃線轉(zhuǎn)種。 3)檢查血液標本是否適量，并在申請單上注明采血量。 三、標本驗收 1．血培養(yǎng)瓶驗收 1)檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染。選用可中和或吸附抗菌藥物的培養(yǎng)基。 4)可疑細菌性心內(nèi)膜炎，在 l～ 2h內(nèi) 采集 3 份血標本，如果 24h 后陰性，再采集 3 份以上的血標本。 2)不明原因發(fā)熱，如隱性膿腫，傷寒熱和波浪熱，先采集 2～ 3 份血標本，24～ 36 h 后估計體溫升高之前 (通常在下午 )再采集 2 份以上。對間歇性 寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前 ～ 1h采血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后 lh 進行。血液和肉湯之比為 1： 5～ l： 10。立即送檢，切勿冷藏。 2)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭 (如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭 )直接注入血培養(yǎng)瓶，或嚴格按廠商推薦的方法采血。 2)用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞子表面殘余酒精，然后注入血液。 對碘過敏的患者，用 70％酒精消毒 60s，待酒精揮發(fā)干燥后采血。 2)1％～ 2％碘酊作用 30s 或 10％碘伏 60s，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達 3cm以上。對入院危重感染患者在未進行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時采集血培養(yǎng)。 106/L)，血小板減少等，或同時具備上述幾種體癥的臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng)。 廣東省汕尾逸 揮 基金醫(yī)院 微生物室 標準操作程序文件 撰 寫 人 ： 批 準 人 ： 批準日期 ： 2020 年 5 月 10 日 啟用日期 ： 2020 年 10 月 1 日 實驗室 主 題 文件編號 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 目 錄 第 2 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 目 錄 臨床標本檢驗 SOP W001 血培養(yǎng)操作規(guī)范 ???????????????? ??????? . 3 W002 尿路感染細菌學檢查規(guī)范 ?????????????????? ? 15 W003 下呼吸道感染細菌學檢驗操作規(guī)范 ???????????? ??? 22 W004 糞便細菌培養(yǎng)操作規(guī)范 ???????????????????? 29 W005 抗菌藥物敏感性試驗規(guī)范 ?????????????????? ? 44 W006 皮膚、軟組織感染（含膿腫）實驗室感染規(guī)范 ?????????? 59 W007 生殖道感染臨床細菌學檢驗規(guī)范 ?????????????? ?? 64 W008 眼部細菌學檢查標準化建議 ?????????????? ???? 72 W009 支原體感染的實驗室操作規(guī)范 ?????????? ??????? 76 W010 結(jié)核病細菌學檢查 ????? ?? ??????????????? 83 W011 醫(yī)院感染監(jiān)測標本操作規(guī)范 ????????????????? ? 91 W012 革蘭染色操作規(guī)范 ????????????????????? ? 94 W013 抗酸染色操作規(guī)范 ???????? ?????????????? 96 W014 細菌檢驗流程 ???????? ???????????????? 98 W015 氧化酶操作規(guī)范 ???????? ??????????????? 100 W016 觸 酶 操作規(guī)范 ???????? ?????????????? ?? . 101 臨床微生物室管理 SOP W017 檢驗科臨床微生物室日常工作安排 ???????? ??????? 102 W018 臨床細菌檢驗的質(zhì)量保證（室內(nèi)：溫度、培養(yǎng)基等；室間） ???? 103 W019 生物安全 ???????? ?????????????????? 111 W020 消毒規(guī)范（工作環(huán)境、標本、廢舊培養(yǎng)物等） ???????? ?? 113 W021 菌種管理規(guī)范 ???????? ???????????????? 119 W022 細菌培養(yǎng)儀操作規(guī)范 ???????? ????? ???????? . 121 W023 細菌鑒定儀操作規(guī)范 ???????? ????????????? 124 W024 高壓蒸汽消毒儀操作規(guī)范 ???????? ??????????? 129 W025 抱怨 ???????? ???????????????????? 132 W026 進修生、實習生的培養(yǎng) ???????? ???????????? 135 W027 臨床微生物室管理總則 ???????? ???????????? 137 實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 3 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 血培養(yǎng)操作規(guī)范 一、血標本采集和運送 1．采血指征：一 般患者出現(xiàn)以下一種體癥時可作為采血的重要指征：發(fā)熱(≥ 38℃ )或低溫 (≤ 36℃ )，寒戰(zhàn)，白細胞增多 (計數(shù)大于 10， 000179。 106/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細胞 )，皮膚粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低， CRP 升高及呼吸快，特殊患者 (如血液病 )出現(xiàn)粒細胞減少 (成熟的多形核白細胞 1000179。新生兒菌血癥，應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。 2．皮膚消 毒程序：嚴格執(zhí)行以下三步法： 1） 70％酒精擦拭靜脈穿刺部位待 30s 以上。 3)70％酒精脫碘。 3．培養(yǎng)瓶消毒程序 1)70％酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用 60s。 4．靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序 1)在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳 膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點。 3)血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。 4．采血量 成人采血量是 8～ l0ml，兒童 l～ 5ml。 5．血培養(yǎng)份數(shù)和采血時間 采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進行，在 24h內(nèi)采集 2～ 3份血培養(yǎng) (一次靜脈采血注入到多個培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng) )。特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議： 1)可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎，應(yīng)在不同部位采集 2～ 3 份血標本。 實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 4 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 3)可疑菌血癥或真菌血癥，但血培養(yǎng)持續(xù)陰性，應(yīng)改變血培養(yǎng)方法，以獲得罕見的或苛養(yǎng)的微生物。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)三天，每天采集 2 份。 6．標本運送 采血后應(yīng)該立即送檢， 置 35℃～ 37℃孵箱中，切勿冷藏。 2)檢查瓶子上的標簽與申請單是否相符。 4)對于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長可視信號：培 養(yǎng)瓶內(nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等。 2．不合格血培養(yǎng)標本的處理 1)拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標識與化驗申請單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。 2)補做培養(yǎng)瓶：血標本采集后放置 12h 以上 (手工法除外 )，用不適當類型的培養(yǎng)瓶收集標本，用過期的培養(yǎng)瓶收集標本，采血量不足等。 四、儀器與試劑 1． 儀器： 恒溫 培養(yǎng)箱。 2．血培養(yǎng)瓶處理：密切微生物生長可視信號，對 48～ 72h未生長的培養(yǎng)瓶應(yīng)轉(zhuǎn)種，行需氧培養(yǎng)。 表 l 血培養(yǎng)陽性后根據(jù)革蘭染色特征選擇轉(zhuǎn)種培養(yǎng)基類型的建議 染色特點 5～ 10％ CO2 孵育 a 血瓊脂 巧克力瓊 脂 中國蘭或麥康凱或EME 血瓊脂 PEA 或CAN 革蘭陽性 球菌 X X X 桿菌 X X X 革蘭陰性 球菌 X X X X 實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 5 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 桿菌 X X X X X 真菌 b X X 持續(xù)監(jiān)測陽性，革蘭染色陰性 c X X X a 所有培養(yǎng)至少孵育 48h； EMB：伊紅美藍瓊脂； PEA：苯乙基醇瓊脂；CAN：多粘菌素一萘啶酮酸瓊脂。 X：選擇的培養(yǎng)基。 革蘭染色未找到細 菌的血培養(yǎng)瓶，補充丫啶橙染色檢查彎曲菌和布魯菌，發(fā)現(xiàn)陽性者進行鑒定報告，未發(fā)現(xiàn)陽性則應(yīng)轉(zhuǎn)種厭氧和需氧血平板，然后繼續(xù)培養(yǎng)監(jiān)測至終報告的時間，注意其他不常見細菌見附錄。 細菌鑒定見 M16，藥敏試驗見 M5。報告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期標本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來源。 中級報告：報告直接抗菌藥物敏感試驗結(jié)果和細菌種屬的初步鑒定結(jié)果 最終報告：報告細菌種屬名和標準抗菌藥物敏感試驗結(jié)果 2．陰性報告：普通血培養(yǎng) 3 天無細菌生長可（電話）報告為：“ 72h 培養(yǎng)未見細菌生長”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至 7 天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長，可發(fā)補充 /最終報告。 附 錄 附一：血培養(yǎng)特殊致病菌的處理 1．分枝桿菌：從血液中分離培養(yǎng)分枝桿菌需特殊培養(yǎng)基，通常局限于免疫抑制和 AIDS 的患者。 2．裂解 離心、 BACTEC 12B 或 13A， Bact／ Alert(r)MP 培養(yǎng)基均可用于分離培養(yǎng)分枝桿菌。 BACTEC 12B 培養(yǎng)基會抑制某 些鳥分枝桿菌復(fù)合體的生長， BACTEC 13A 培養(yǎng)基專門用于分離血液中的分枝桿菌，接種的血量為 5ml，它避免了處理裂解 離心血培養(yǎng)物時所遇到實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 6 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 的潛在危險性。含 10％蔗糖或甘露醇滲透壓恒定的培養(yǎng)基，適合培養(yǎng)細胞壁缺陷的細菌。 3．布魯菌屬：通常將血液接種至含有雙相培養(yǎng)基的卡斯塔涅達培養(yǎng)瓶(Castaneda bottles)中進行培養(yǎng)。液相培養(yǎng)基采用不含瓊脂的相同培養(yǎng)基基礎(chǔ)，當培養(yǎng)瓶內(nèi)瓊脂凝固后，再以無菌手續(xù)將液相培養(yǎng)基基礎(chǔ)傾入瓶內(nèi)即可。無菌生長，將培養(yǎng)瓶傾斜，使肉湯流過瓊脂表面。 4．營養(yǎng)變異鏈球菌：該種細菌的生長需要補充琉醇復(fù)合物和維生素 B6。然而傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng) 基中需要補充鹽酸 磷酸