細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-展示頁
2025-04-01 12:04本頁面
【正文】 離心5min；重復(fù)上述條件，再離心洗滌1 次。2．（共2 組）取雞紅細(xì)胞懸液1mL，移人10mL 離心管， 加入4mL ％生理鹽水混勻。普遍認(rèn)為聚乙二醇分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，從而使細(xì)胞發(fā)生融合。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎谩⒑啽?，且融合效果穩(wěn)定。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個領(lǐng)域，如研究核質(zhì)關(guān)系、繪制染色體基因圖譜、制備單克隆抗體、育種等。這一技術(shù)已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合、種間細(xì)胞融合，而且也能誘導(dǎo)動植物細(xì)胞間產(chǎn)生融合。人工細(xì)胞融合開始于五十年代，六十年代到七十年代作為一門新興的技術(shù)發(fā)展很快，應(yīng)用范圍極廣。實(shí)驗(yàn)三：聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)的細(xì)胞融合【基本原理】兩個以上的細(xì)胞合并成為一個雙核或多核細(xì)胞稱為融合細(xì)胞。膜通透性大小主要取決于分子大小和分子極性。氯化鈉、硝酸鈉、硫酸鈉溶液不溶。① 氯化銨 ② 硝酸鈉 ③ 硫酸鈉 ④ 醋酸胺⑤ 草酸銨 ⑥ 葡萄糖 ⑦ 甘油 ⑧ 乙醇⑨ 丙酮【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 土豆凝集素能使雞紅細(xì)胞凝集，PBS 對照液中紅細(xì)胞分散均勻。]2．觀察10%的雞紅細(xì)胞懸液，可見該懸液為一種不透明的紅色液體3．觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水， 雞紅細(xì)胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血則文字可被看清）。【方法步驟】1．制備土豆凝集素液和紅細(xì)胞懸浮液，制備無血清的雞紅細(xì)胞懸液，使凝集素液和紅細(xì)胞懸液混合，靜置后，在光鏡（低倍）下觀察凝集素使紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象。當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入細(xì)胞后可引起滲透壓升高，水分子隨即進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞膨脹，當(dāng)膨脹到一定程度時，紅細(xì)胞膜會發(fā)生破裂，血紅素溢出，此時，原來不透明的紅細(xì)胞懸液突然變成紅色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為紅細(xì)胞溶血?？蛇x擇性地讓某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞，各種物質(zhì)出入細(xì)胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴(kuò)散，以至于在高滲環(huán)境中，動物細(xì)胞會失水而收縮；在低滲環(huán)境中，動物細(xì)胞會吸水膨脹直至破裂。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。實(shí)驗(yàn)一、二：細(xì)胞凝集反應(yīng)和細(xì)胞膜通透性的觀察【基本原理】細(xì)胞膜表面的有分支狀糖外被，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細(xì)胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。細(xì)胞膜是細(xì)胞與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)將紅細(xì)胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對不同溶質(zhì)的通透性不同，使得不同溶質(zhì)透入細(xì)胞的速度相差很大，有些溶質(zhì)甚至不能透入細(xì)胞。由于各種溶質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度不同，所以不同的溶質(zhì)誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血的時間不同，相反可通過測量溶血時間來估計(jì)細(xì)胞膜對各種物質(zhì)通透性的大小。（以PBS 緩沖液加2％血細(xì)胞作對照實(shí)驗(yàn)）[土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 載玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2％紅細(xì)胞液,充分混勻靜置20 min , 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。4．觀察雞紅細(xì)胞對不同物質(zhì)的通透性（1）取一支試管， 的Nacl 溶液4ml， 雞紅細(xì)胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如出現(xiàn)溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時間（從加入4ml 溶液算起）（2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對照組未凝血 ， 實(shí)驗(yàn)組凝血。醋酸銨草酸銨氯化銨乙醇甘油丙酮葡萄糖。小分子比大分子容易通過，非極性比極性易通過，帶電荷離子高度不透。在通常情況下，兩個細(xì)胞接觸并不發(fā)生融合現(xiàn)象，因?yàn)楦髯源嬖谕暾募?xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個細(xì)胞膜發(fā)生一定的變化，就可促進(jìn)兩個或多個細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合，繼之細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個大的融合細(xì)胞。細(xì)胞與組織不同，不排斥異類、異種細(xì)胞。因此，融合細(xì)胞的研究為生物學(xué)無論在基礎(chǔ)理論上或生產(chǎn)實(shí)踐上開辟了一條新的道路。細(xì)胞融合(Cell fusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的過程。細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多． 常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus) ， 聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖。聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)為：HOH2C(CH2OCH2)nCH2OH，相對分子質(zhì)量在2006000 均可用作細(xì)胞融合劑。【方法步驟】1．采血及雞紅細(xì)胞懸液的制備（同教材57 頁）。1000r／min 離心5 min。4．收集最后1 次離心沉淀的血細(xì)胞，加入適量（5－8mL）的GKN 液，輕吹散，混勻。6．利用光學(xué)顯微鏡 (高倍) 以未融合細(xì)胞為對照觀察2 個靠近細(xì)胞形成融合的過程。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞
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