細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞融合-展示頁(yè)
2025-01-27 02:30本頁(yè)面
【正文】 偏堿時(shí)融合效應(yīng)最高 。 2化學(xué)法（聚乙二醇） ? PEG: 聚乙二醇（ polyethylene glycol, PEG） ? 分子式： HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH ? 性狀：白色蠟狀固體，具有強(qiáng)烈的凝集、沉淀蛋白質(zhì)的作用 ? 分子量 〉 10006000u，可作誘融劑。 自發(fā)細(xì)胞融合現(xiàn)象在自然界中并不多見(jiàn)，常見(jiàn)的主要有以下幾種情況： 1. 精子和卵子受精 2. 肌管的形成 3. 胚胎著床 4. 巨細(xì)胞的形成 5. 破骨細(xì)胞的形成 6. 腫瘤細(xì)胞融合 （ 2）誘導(dǎo)細(xì)胞融合 人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合是在 人為條件下 發(fā)生的細(xì)胞融合現(xiàn)象 常用的誘導(dǎo)方法有三種： 1. 生物法（病毒誘導(dǎo)法等） 2. 化學(xué)法（ PEG誘導(dǎo)法、 Ca 2+誘導(dǎo)法、 溶血卵磷脂誘導(dǎo)法等） 3. 物理法（電誘導(dǎo)法等） 常用的病毒：仙臺(tái)病毒（ Sendal virus), 又稱(chēng)日本血凝病毒 ? （ Hemagglutinating virus of Japan,HVJ） ? 屬于副粘液病毒科， RNA病毒，圓球形 ? 1962年，日本仙臺(tái)東北大學(xué)學(xué)者岡田發(fā)現(xiàn)仙臺(tái)病毒可誘導(dǎo)細(xì)胞融合。 細(xì)胞橋的形成是細(xì)胞融合最關(guān)鍵的一步 ，融合過(guò)程中兩個(gè)細(xì)胞膜從彼此接觸到破裂形成細(xì)胞橋。 動(dòng)物克隆 上海第二醫(yī)科大學(xué) 陳瑩博士 2022年，她將一 5歲男孩的包皮細(xì)胞與一只已去除細(xì)胞核 的新西蘭兔卵母細(xì)胞融合，獲得了人類(lèi)早期胚胎。 種內(nèi)雜交細(xì)胞 （ intraspecific hybrid cell） :同種細(xì)胞融合而成的細(xì)胞 種間雜交細(xì)胞（ interspecific hybrid cell） : 不同種的細(xì)胞融合而成的細(xì)胞 非對(duì)稱(chēng)細(xì)胞融合（ asymmetric fusion）： 利用物理或化學(xué)方法使某親本細(xì)胞的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再進(jìn)行融合。細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn) 概念 促融合劑與融合技術(shù) 應(yīng)用與意義 重點(diǎn) 一 定義： Cell fusion ?細(xì)胞融合 ： (Cell fusion)又稱(chēng) ?體細(xì)胞雜交 （ somatic hybridization） 是指將不同來(lái)源的原生質(zhì)體 (除去細(xì)胞壁的細(xì)胞 )相融合， 將兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成 一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。 人心肌細(xì)胞 人肝臟細(xì)胞 種內(nèi)雜交細(xì)胞 人細(xì)胞 鼠細(xì)胞 種間雜交細(xì)胞 在適當(dāng)?shù)臈l件下，細(xì)胞融合在一起，產(chǎn)生具有原來(lái)兩個(gè)細(xì)胞基因信息的單個(gè)核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞（ hybrid cell）。 細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)失活的有物理和化學(xué)方法： ，如 X射線、 r射線等，它們能使細(xì)胞核失活； ，核失活－碘乙酰胺（ IOA）、碘乙酸(Iodoacetate)；質(zhì)失活－羅丹明（ R－ 6－ G，它是一種親脂染料，能夠抑制線粒體的氧化磷酸化過(guò)程而達(dá)到失活作用。 二細(xì)胞融合的原理 ? 熒光標(biāo)記的小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn) 將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素 (fluorescin)結(jié)合 , 人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明 (rhodamine)結(jié)合； 顯微鏡下的細(xì)胞融合過(guò)程 細(xì)胞融合的過(guò)程 細(xì)胞互相靠近 細(xì)胞膜融合 細(xì)胞橋形成 細(xì)胞質(zhì)融合 細(xì)胞核融合 ? 細(xì)胞融合主要經(jīng)過(guò)了兩原生質(zhì)體或細(xì)胞互相靠近、細(xì)胞橋形成、胞質(zhì)滲透、細(xì)胞核融合主要步驟。 細(xì)胞融合過(guò)程中兩個(gè)細(xì)胞膜的變化 形成細(xì)胞橋的具體變化 細(xì)胞融合分為兩種： （ 1）自發(fā)細(xì)胞融合 自發(fā)細(xì)胞融合（ spontaneous cell fusion）是在 未施加任何誘導(dǎo)條件 的情況下所發(fā)生的細(xì)胞融合現(xiàn)象。 病毒促使細(xì)胞融合 兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近，使兩個(gè)細(xì)胞膜、胞質(zhì)間互相滲透 細(xì)胞核互相融合 ，進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，雜種子細(xì)胞 。 20世紀(jì) 70年代，華裔科學(xué)家高國(guó)南發(fā)現(xiàn)聚乙二醇能誘導(dǎo)細(xì)胞融合 ? 分子量小的 PEG， 融合效應(yīng)差 ， 又有毒性 ，分子量過(guò)大 ， 則粘性太大 ， 不易操作 。 ? 用作細(xì)胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為 4000 者 ， 常 用 濃 度 為 50 ％ ，~ 聚乙二醇 普遍認(rèn)為聚乙二醇分子能改變各類(lèi)細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂 類(lèi)分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用， 從而使細(xì)胞發(fā)生融合 基本原理 ? 聚乙二醇 (PEG)是一種多聚化合物，商品名卡波蠟 (Carbowax)。 ? 融合過(guò)程中應(yīng)注意 ? ① 事先要做好兩種原生質(zhì)體的識(shí)別標(biāo)記 ， 如色素 、缺陷型 、 抗性標(biāo)記等 。 ? ③ 常用 PEG的分子量通常為 4000~6000， 加熱熔化與 Eagle溶液配成 50％ (W／ V)濃度 (小分子質(zhì)量的PEG配成 55％ 濃度 )。 1981年， Scheurich和 Zimmermann發(fā)明了電誘導(dǎo)細(xì)胞融合。 細(xì)胞電融合 ? 原理： 懸于大小不同的兩平行電極間的低導(dǎo)電率溶液中的細(xì)胞，在 1— 100MHz和100— 1000V/cm的交流電場(chǎng)中，會(huì)向小電極移動(dòng)，并極化成偶極子，而沿電場(chǎng)方向發(fā)生 雙向電泳 ，此時(shí)再加上適當(dāng)強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間的高壓電脈沖，即可使相鄰細(xì)胞膜的接觸區(qū)產(chǎn)生 可逆電降解 ，從而觸發(fā)細(xì)胞融合。 原生質(zhì)體電融合過(guò)程 1）在高頻電流電場(chǎng)下的相互接觸。 注意事項(xiàng) ? 1）對(duì)介質(zhì)要求高，一般用高純度的蒸餾水并選用適當(dāng)?shù)姆请娊橘|(zhì)溶液，如甘露醇等配制等滲性介質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)： ? 融合率高，達(dá) 70％－ 80％，甚至 100％ ? 可在顯微鏡下定向誘導(dǎo)細(xì)胞融合 ? 可直接挑選雜種細(xì)胞 ? 重復(fù)性強(qiáng) 、 對(duì)原生質(zhì)體傷害??；裝置精巧 、方便簡(jiǎn)單；免去 PEG誘導(dǎo)后的洗滌過(guò)程 、 誘導(dǎo)過(guò)程可控制性強(qiáng)等 。 動(dòng)物細(xì)胞融合 影響因素 動(dòng)物細(xì)
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1