細胞增殖mtt檢測經(jīng)驗總結(jié)-展示頁
2025-04-01 12:03本頁面
【正文】 小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N，N二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH ）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。細胞增殖檢測：MTT實驗經(jīng)驗總結(jié)MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3（4，5）dimethylthiahiazo （zy1）3，5di phenytetrazoliumromide， MTT噻唑藍為基礎。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍色的formazan結(jié)晶，formazan結(jié)晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。也可以用DMSO來溶解。實驗的時候我一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。培養(yǎng)細胞同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。二、注意事項選擇適當?shù)眉毎臃N濃度。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。其他試驗步驟保持一致，最后比色以空白調(diào)零。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，然
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