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細胞增殖mtt檢測經(jīng)驗總結(jié)-展示頁

2025-04-01 12:03本頁面
  

【正文】 小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul。MTT粉末和溶液保存時都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH )的MTT溶解液中溶解,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細胞數(shù)目。細胞增殖檢測:MTT實驗經(jīng)驗總結(jié)MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3(4,5)dimethylthiahiazo (zy1)3,5di phenytetrazoliumromide, MTT噻唑藍為基礎。MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈,在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂,生成藍色的formazan結(jié)晶,formazan結(jié)晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。也可以用DMSO來溶解。實驗的時候我一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。培養(yǎng)細胞同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。二、注意事項選擇適當?shù)眉毎臃N濃度。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。其他試驗步驟保持一致,最后比色以空白調(diào)零。把藥品稀釋成不同的濃度,然后計算各自的抑制率,以藥品的濃度為橫坐標,抑制率為縱坐標作圖,然
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