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細(xì)胞增殖mtt檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-展示頁

2025-04-01 12:03本頁面
  

【正文】 小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板,每孔體積200ul。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH )的MTT溶解液中溶解,利用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細(xì)胞數(shù)目。細(xì)胞增殖檢測(cè):MTT實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)MTT分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑3(4,5)dimethylthiahiazo (zy1)3,5di phenytetrazoliumromide, MTT噻唑藍(lán)為基礎(chǔ)。MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈,在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂,生成藍(lán)色的formazan結(jié)晶,formazan結(jié)晶的生成量?jī)H與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。也可以用DMSO來溶解。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候我一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。培養(yǎng)細(xì)胞同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。二、注意事項(xiàng)選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。其他試驗(yàn)步驟保持一致,最后比色以空白調(diào)零。把藥品稀釋成不同的濃度,然后計(jì)算各自的抑制率,以藥品的濃度為橫坐標(biāo),抑制率為縱坐標(biāo)作圖,然
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