細胞增殖mtt檢測經驗總結-wenkub
2023-04-07 12:03:58 本頁面
【正文】 TT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N，N二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH ）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。一、步驟接種細胞用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。比色選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點線圖即可！三、舉例、稀釋倍數為10，、。一般腫瘤細胞系空白處理的調亡率應低于1%，用藥后一般為510%（Annexin V），細胞周期的亞G0峰比較明顯。二、MTT法檢測細胞增殖實驗的注意事項培養(yǎng)好細胞點板養(yǎng)細胞沒啥好說的，如果不知道細胞如何養(yǎng)，那就看看相關的文獻方法。這時可以將細胞不進行計數，將消化好的細胞混勻后（可能是10ml）直接在一個廢棄（最好進行過無菌處理）的96孔板中依次加入180、100、50微升細胞，將細胞放置幾分鐘就會沉到板底了，這時在顯微鏡下觀察，推測哪個孔的細胞48 h能基本長滿板底，假設50微升的孔比較合適，而點板時沒孔需點200 微升，那么就將細胞濃度再稀釋4倍就可以正式點板了，這時順便將細胞進行計數（因為實驗記錄要求寫啊）。點板時一定要將細胞消化
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