細胞增殖mtt檢測經(jīng)驗總結(jié)(編輯修改稿)
2025-04-19 12:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 20ulMTT，150ulDMSO 加DMSO之前要盡量去掉培養(yǎng)液，便于DMSO溶解甲臜顆粒進行比色測定一般每孔4000個細胞為宜，既細胞濃度在20000個/ml，MTT加20ul，作用四小時后洗掉上清液，注意不要將甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脫色搖床上振蕩10分鐘，然后測吸光值。一般要低于IC50，避免非調(diào)亡性殺傷的細胞太多，造成流式細胞儀檢測碎片太多。我一般用1/21/3的IC50，作用時間為36h。一般腫瘤細胞系空白處理的調(diào)亡率應(yīng)低于1%，用藥后一般為510%（Annexin V），細胞周期的亞G0峰比較明顯。MTT法心得MTT實驗是檢測細胞活力的實驗方法，由于細胞活力與細胞數(shù)呈正相關(guān)，因此也常常用來檢測細胞的增殖情況。一、MTT的原理活細胞有琥珀酸脫氫酶，將MTT還原成棕褐色沉淀。由于一般介紹園子里已經(jīng)很多，筆者將自己的心得按照實驗流程與大家交流交流。二、MTT法檢測細胞增殖實驗的注意事項培養(yǎng)好細胞點板養(yǎng)細胞沒啥好說的，如果不知道細胞如何養(yǎng)，那就看看相關(guān)的文獻方法。如果知道了細胞的名字，這個網(wǎng)站上的培養(yǎng)方法是標準培養(yǎng)方法。當(dāng)然可以根據(jù)自己實驗要求進行修改。由于細胞計數(shù)很繁瑣，點板時的細胞濃度是最難掌握的，這一點筆者的心得如下：自己先將細胞養(yǎng)一段時間，大概了解細胞的增殖情況，在MTT檢測時實際上要求細胞大概能長滿96孔板的8090%，如果打算養(yǎng)48小時就檢測，根據(jù)細胞的生長情況反推點
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