細(xì)胞增殖mtt檢測經(jīng)驗(yàn)總結(jié)(已修改)
2025-04-04 12:03 本頁面
【正文】 細(xì)胞增殖檢測：MTT實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)MTT分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑3（4，5）dimethylthiahiazo （zy1）3，5di phenytetrazoliumromide， MTT噻唑藍(lán)為基礎(chǔ)。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍(lán)色的formazan結(jié)晶，formazan結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N，N二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH ）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候我一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。一、步驟接種細(xì)胞用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul。培養(yǎng)細(xì)胞同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。呈色培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配），終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。比色選擇
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