微生物限度檢查方法學驗證方案-展示頁
2024-11-03 08:23本頁面
【正文】 日 期： 復核人： 日 期： 4. 儀器校驗： 序號 儀器名稱及型號 器具編號 有效期至 檢定單位 檢定證書 編號 1 培養(yǎng)箱 2 培養(yǎng)箱 3 立式壓力滅菌鍋 （壓力表） 鼓風干燥箱 題 目： L丙氨酰 L谷氨酰胺微生物限度檢查方法驗證方案 第 5 頁 共 16 頁 架托天平 檢查人： 日 期： 復核人： 日 期： 5．驗證具體內(nèi)容： 概述： 根據(jù)中華人民共和國藥典 2020 年版二部附錄Ⅹ Ⅲ C 微生物限度檢查法的要求，為保證驗證檢驗質(zhì)量，確保檢驗結果的準確性和可靠性，對微生物限度方法學驗證工作進行了考察，現(xiàn)將測定結果報告如下： . 驗證目的： 為確保所采用的方法適合于該藥品微生物限度檢查，特進行方法學驗證試驗。 試驗內(nèi)容 ： L丙氨酰 L谷氨酰 批號 、 、 ：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（ ）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（ ）、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（ ）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（ ）、 4甲基傘形酮葡糖苷酸（ ）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（ ）、改良馬丁培養(yǎng)基（ ）以上培養(yǎng)基均由中國藥品生物制品檢定所提供。 菌液的制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基10ml 中， 30~35℃培養(yǎng) 18~24 小時 取經(jīng) 30~35℃培養(yǎng) 18~24 小時的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基各 1ml 加到 9ml 的 %無菌氯化鈉溶液中，采用 10倍遞增稀釋法，稀釋至 105~107使每 1ml 含菌 數(shù)為 50~100cfu(見表 1) 接種白色念珠菌新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中， 23~28℃培養(yǎng) 48~72 小時 題 目： L丙氨酰 L谷氨酰胺微生物限度檢查方法驗證方案 第 6 頁 共 16 頁 取經(jīng) 23~28℃培養(yǎng) 48~72 小時培養(yǎng)的白色念珠菌 1ml 含加到 %無菌氯化鈉溶液中，采用 10 倍遞增稀釋法，稀釋至 104~106~使每 1ml 含菌數(shù)為 50~100cfu。 23~28℃培養(yǎng) 5~7天的黑曲霉新鮮培養(yǎng)物，加入 3~5ml 含 %無菌氯化鈉溶液，將孢 子洗脫，然后吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，按 10 倍遞增稀釋法，稀釋至 105~107使每 1ml 含菌數(shù)為 50~100cfu。 ,黑曲霉 2種菌液 (≤ 100cfu/ml)1ml注入無菌培養(yǎng)皿中 ,每種菌液平行 2個平皿 ,注入 45℃左右的改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基約 15~20ml,23~28℃培養(yǎng) 72小時 ,計數(shù)。 方法驗證： 方法：采用平皿計數(shù)法 稀釋劑： %無菌氯化鈉 — 蛋白胨緩沖液（ PH=7） %無菌氯化鈉溶液 取樣量：按中國藥典 2020 年版規(guī)定的取樣方法，供試品的檢驗量為 10g。 試驗方法 題 目： L丙氨酰 L谷氨酰胺微生物限度檢查方法驗證方案 第 7 頁 共 16 頁 試驗組：取供試液 1ml（ 1： 10）注入無菌平皿中，分別注入 5 種（ 50100cfu/ml）的試驗菌，并立即傾注 45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與改良馬丁 瓊脂培養(yǎng)基約 15~20ml，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在 30~35℃培養(yǎng) 48 小時；改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基在 23~28℃培養(yǎng) 72小時，每株試驗菌平行制備 2 個平皿，按平皿法計數(shù)菌數(shù)。 供試品對照組：依照微生物限度檢查操作規(guī)程，取供試品 10g，加 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液至 100ml，振蕩，溶解混勻，分別制備 1： 102及 1： 103的供試液，取供試液
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