【正文】 限度檢查質(zhì)量標準 項目 標準規(guī)定 細菌 總數(shù)≤ 100 個 /ml 霉菌、酵母菌 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果判斷 在 3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的 菌回收率應(yīng) 不低于 70%。 6 測試方 法 供試品：制水間送水口 1 純化水 《中國藥典》 2020 年版二部微生物限度檢查 —— 薄膜過濾法 培養(yǎng)基及菌種 經(jīng)適用性檢查符合規(guī)定的培養(yǎng)基。 菌液制備 取新鮮的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 經(jīng) ℃培養(yǎng) h，用 ％無菌氯化鈉溶液10 倍稀釋 106制成每 1ml 含菌數(shù)為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數(shù)備用。 取新鮮的黑曲霉培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基，經(jīng) ℃培養(yǎng) d，加入 ml 含 %（ ml/ml）聚 山梨酯 80 的 ％無菌氯化鈉溶液，將霉菌孢子洗脫。 、霉菌及酵母菌的計數(shù)方法驗證試驗 供試品對照組： 用滅菌注射器取少量 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液注入滅菌薄膜過濾器，潤濕濾膜，再取充分混勻的純化水樣 1ml 注入濾器，再用適量的 無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，使總沖洗量為 100ml,沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于已制備好的平板上， 按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)；細菌、霉菌及酵母菌各制備 2 個平皿。 試驗組： 取供試液 1ml，過濾，沖洗，分別在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、入白色念珠菌和黑曲霉試驗菌懸液各 1ml，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。 陰性對照組：取實驗用的稀釋液 1ml，制備濾膜，濾膜菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜，均不得有菌生長。 培養(yǎng)和計數(shù) 以上各組中做細菌計數(shù)的平皿與 ℃倒置 培養(yǎng) 天，霉菌、酵母菌與 ℃倒置培養(yǎng) 天，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數(shù)，必要時，可適當延長培養(yǎng)時間至 天進行菌落計數(shù)報告。點計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。 一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數(shù)，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計數(shù)。然后將營養(yǎng)瓊脂上的霉菌和酵母菌或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上細菌數(shù)與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的細菌數(shù)進行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌落數(shù)為計數(shù)結(jié)果。 計算回收率： 試驗組的菌數(shù)回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數(shù) — 供試品對照組的平均菌落數(shù)） /菌液組的平均菌落數(shù) 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照 組平均菌落 /菌液組平均菌落數(shù)數(shù) )液各 1ml，分別注入平皿中，立即傾注培養(yǎng)基，每株試 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%。 八 測試結(jié)果 細菌、霉菌 及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果見附表 1，此表三份次數(shù)分別為 3次。 附表一 附表一 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果 檢驗日期： 試驗 分類 實驗 次數(shù) 大腸埃希菌 金黃色 葡萄球菌 枯草芽孢 桿菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 試驗組 菌液組 稀釋劑對照組 供試品 對照組 陰性對照組 稀釋劑對照組菌回收率 試驗組的 菌回收率 結(jié)果判定 結(jié)論： 檢驗人： 復(fù)核人： 報告日期： 璽噱錐汰葡柔促汞甌芭踵篪猾餉鉿窗盜忮郯敞鏌唯范湖袤撮難蕓窆邏兜撾涫淺鉦馱拐萸涂拈搬碭雪河轄喜豎癇柔皋鉺栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘗孜撾撐櫻砧冕嶧噦妻朐弈媯朧淑嘴惴穌母膝增釁皆涼臌糞輯