常用免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及方法(1)-展示頁
2025-01-30 14:50本頁面
【正文】 凝膠內(nèi)沉淀技術(shù) ， 抗原抗體 、 免疫電泳等血清血技術(shù) 19591974：放射標(biāo)記免疫技術(shù) 、 酶標(biāo)免疫技術(shù) 、 生物素 親和素標(biāo)記免疫技術(shù) 、 熒光標(biāo)記免疫技術(shù) 、 金 (銀 )標(biāo)記免疫等技術(shù)； 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 、 免疫分子轉(zhuǎn)染技術(shù) 、 細(xì)胞和細(xì)胞因子測定技術(shù) 20世紀(jì) 70年代后期：免疫及分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展成熟 ， 單克隆抗體問世 ， 組織相容性抗原 、 B細(xì)胞免疫球蛋白基因重組 ， T細(xì)胞受體 1980： PCR技術(shù) 生物芯片技術(shù) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù) 免疫學(xué)方法就是通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)機(jī)體免疫反應(yīng)的過程 。常用免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及方法 第一節(jié) 免疫學(xué)方法概論 一 、 免疫學(xué)方法的發(fā)展史 1976年： Jenner發(fā)明了接種牛痘方法預(yù)防天花 2個世紀(jì)后被廣泛接受 ， 1979年 （ WHO） 天花滅跡 。 19世紀(jì)末期： koch病原體是感染性疾病病因 促進(jìn)了實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)的發(fā)展 。 基本參與單位有：抗原 抗體 免疫細(xì)胞和免疫分子 第二節(jié) 體液免疫學(xué)方法 一 、 抗原制備 1. 天然抗原制備 (1)粗抗原的提?。簝鋈诜?、 冷熱交替法 、 超聲法 (12HE) (2)粗抗原純化： ? 選擇性沉淀法：鹽析沉淀法 、 核酸沉淀法 ? 凝膠過濾和離子交換層析 ? 親和層析法 ? 蛋白電泳 2. 合成抗原制備 化學(xué)合成高分子氨基酸聚合物 ， 即多肽 。 具有抗多種不同抗原的表位 。 產(chǎn)生方法： B細(xì)胞克隆與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞 3. 基因工程抗體 (engineer antibody) 應(yīng)用抗體庫技術(shù)產(chǎn)生 方法：將某種動物所有抗體的可變區(qū)基因克隆到質(zhì)?；蚴删w中并表達(dá) ， 然后利用不同抗原篩選出攜帶特異抗體的基因克隆 ， 從而獲得特異性抗體 。這種酶標(biāo)抗體或抗原既保留其免疫原性 ， 又保留酶的活性；中外 ， 使抗原或抗體固定到某種固相載體表面并保持其免疫活性 ， 利用抗原 、 抗體復(fù)合物的免疫學(xué)反就原理來測定未記標(biāo)的抗原 (或抗體 )。 加入酶反應(yīng)的底物后 ， 底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物 ， 其量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān) ， 故可根據(jù)反應(yīng)顏色的深淺來進(jìn)行定性或定量分析 。 放射免疫分析多數(shù)用 125I來標(biāo)記抗體 。 在此固相載體中標(biāo)記的特異性抗體與特定的未標(biāo)記抗原產(chǎn)生特異性免疫結(jié)合 。 未結(jié)合的標(biāo)記抗體則用洗液去除 。 用 125I標(biāo)記的抗體 ， 其放射性強(qiáng)度可以直接測定 。 而后將熒光標(biāo)記了的抗體作為一個試劑 ， 在特定的條件下浸染標(biāo)本 ， 使之與標(biāo)本中相應(yīng)的抗原產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng) 。 (四 )免疫組織化學(xué)技術(shù) (immunolhistochemistry) 檢測組織切片中蛋白分子在細(xì)胞中分布的另一種方法 (類似于免疫熒光技術(shù) )為免疫組織化學(xué)技術(shù) 。 結(jié)合后的抗原 、 抗體復(fù)合物中含有的酶可將再加入的無色酶底物通過化學(xué)反應(yīng)呈色 ， 最終借助顯微鏡在細(xì)胞 、 亞細(xì)胞水平檢測各種抗原物質(zhì)及其分析 。其基本過程是將蛋白質(zhì)樣品 (如血清或細(xì)胞組織碎片 )在凝膠電泳中分離 ， 再通過電轉(zhuǎn)染將已分離的蛋白南分子轉(zhuǎn)移到固相膜上 ， 然后在固相膜上用標(biāo)記 (放射標(biāo)記或酶標(biāo)記
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