常用免疫學相關實驗技術及方法(1)-文庫吧
2025-01-06 14:50 本頁面
【正文】 抗體的可變區(qū)基因克隆到質粒或噬菌體中并表達 ， 然后利用不同抗原篩選出攜帶特異抗體的基因克隆 ， 從而獲得特異性抗體 。 三 、 抗體的應用及其相應的免疫學技術 (一 )ELISA ELISA的基本原理是利用酶標記抗體或抗原 ， 使之成為酶標抗體 (或抗原 )。這種酶標抗體或抗原既保留其免疫原性 ， 又保留酶的活性；中外 ， 使抗原或抗體固定到某種固相載體表面并保持其免疫活性 ， 利用抗原 、 抗體復合物的免疫學反就原理來測定未記標的抗原 (或抗體 )。 具體操作時是把受檢標本 (檢測其中的抗體或抗原 )和酶標抗原蔌抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應 ， 經洗滌后使固相載體上形成的抗原 、 抗體復合物與其他物質分開 ， 最后結合到固相載體上的酶量與標本中的受檢物質的量成一定的比例 。 加入酶反應的底物后 ， 底物被酶催化變?yōu)橛猩a物 ， 其量與標本中受檢物質的量直接相關 ， 故可根據(jù)反應顏色的深淺來進行定性或定量分析 。 (二 )放射免疫測定 (radioimmunoassay) 放射免疫測定通常用于測定組織液和血液中的激素水平 。 放射免疫分析多數(shù)用 125I來標記抗體 。 被檢測抗原即未標記物 ， 通常吸附在固相載體中 ， 如多孔酶聯(lián)塑料板或試管中 。 在此固相載體中標記的特異性抗體與特定的未標記抗原產生特異性免疫結合 。 非特異性吸附可以通過加入過量的非特異性卵磷脂蛋白或洗滌液來封閉 。 未結合的標記抗體則用洗液去除 。 最終特異性結合的抗原 、 抗體復合物殘留在反應板或試管中 。 用 125I標記的抗體 ， 其放射性強度可以直接測定 。 (三 )免疫熒光技術 (immunofluorescence technology) 免疫熒光技術的原理是將熒光色素與特異性抗體 (或抗原 ， 但少用 )以化學的方式結合起來 ， 但不影響該血清抗體的免疫特性 。 而后將熒光標記了的抗體作為一個試劑 ， 在特定的條件下浸染標本 ， 使之與標本中相應的抗原產生結合反應 。 這個反應的結果 —— 含有熒光標記的抗原 、 抗體結合物 ， 可用熒光顯微鏡來觀察之 。 (四 )免疫組織化學技術 (immunolhistochemistry) 檢測組織切片中蛋白分子在細胞中分布的另一種方法 (類似于免疫熒光技術 )為免疫組織化學技術 。 該方法是用化學的方法將酶與抗體結合起來 (類似于 ELISA)， 然后將標記的抗體與組織切片中的抗原產生特異性的結合 。 結合后的抗原 、 抗體復合物中含有的酶可將再加入的無色酶底物通過化學反應呈色 ， 最終借助顯微鏡在細胞 、 亞細胞水平檢測各種抗原物質及其分析 。 (五 )免疫印跡技術 (immunoblot) 免疫印跡技術也稱 Western blot或蛋白印跡技術 (protein blot)，是 20世紀 70年代末 80年代初發(fā)展起來的一種蛋白質抗原檢測新技術 。其基本過程是將蛋白質樣品 (如血清或細胞組織碎片 )在凝膠電泳中分離 ， 再通過電轉染將已分離的蛋白南分子轉移到固相膜上 ， 然后在固相膜上用標記 (放射標記或酶標記 )的特異性抗體檢測蛋白質抗原煤 。免疫印跡技術結合了凝膠電泳分辯力高和固相免疫測定敏感 、 簡便 、穩(wěn)定等優(yōu)點 。 (六 )免疫電泳技術 免疫電泳技術是電泳分析與沉淀反應的結合產物 。 這種技術有兩大優(yōu)點 ， 是一加快了沒淀反應的速度 ， 二是將一些蛋白質組分利用其電荷的不同將其分開 ， 再分別與抗體反應 ， 以其沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價 。 1. 免疫電泳 2. 對流免疫電泳 3. 火箭免疫電泳 4. 免疫固定電泳 5. 聚丙烯酰胺凝膠電泳 第三節(jié) 細胞免疫學技術 一 、 白細胞的分離 血液中紅細胞與白細胞比例為 600:1~1000:1， 兩
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