常用免疫學(xué)相關(guān)實驗技術(shù)及方法(1)(已修改)
2025-02-02 14:50 本頁面
【正文】 常用免疫學(xué)相關(guān)實驗技術(shù)及方法 第一節(jié) 免疫學(xué)方法概論 一 、 免疫學(xué)方法的發(fā)展史 1976年： Jenner發(fā)明了接種牛痘方法預(yù)防天花 2個世紀(jì)后被廣泛接受 ， 1979年 （ WHO） 天花滅跡 。 19世紀(jì)末期： koch病原體是感染性疾病病因 促進了實驗免疫學(xué)的發(fā)展 。 19世紀(jì) 80年代： Pasteur預(yù)防雞霍亂的疫苗 狂犬病疫苗 1888： Behring發(fā)現(xiàn)了抗體 Methchnikoff發(fā)現(xiàn)了巨噬細(xì)胞 20世紀(jì)初：發(fā)現(xiàn)了調(diào)理素 ， 體液因素可影響吞噬細(xì)胞功能 19001930：認(rèn)識了過敏反應(yīng) ， 發(fā)現(xiàn)了血清病 Arthus反應(yīng) ， 皮膚反應(yīng) 調(diào)理作用 ， 補體結(jié)合反應(yīng) 疫苗研究有了新發(fā)展： BCG—— 結(jié)核 白喉毒素 —— 白喉 19351957：抗體純化 ， 鑒定及測定技術(shù) 、 凝膠內(nèi)沉淀技術(shù) ， 抗原抗體 、 免疫電泳等血清血技術(shù) 19591974：放射標(biāo)記免疫技術(shù) 、 酶標(biāo)免疫技術(shù) 、 生物素 親和素標(biāo)記免疫技術(shù) 、 熒光標(biāo)記免疫技術(shù) 、 金 (銀 )標(biāo)記免疫等技術(shù)； 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 、 免疫分子轉(zhuǎn)染技術(shù) 、 細(xì)胞和細(xì)胞因子測定技術(shù) 20世紀(jì) 70年代后期：免疫及分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展成熟 ， 單克隆抗體問世 ， 組織相容性抗原 、 B細(xì)胞免疫球蛋白基因重組 ， T細(xì)胞受體 1980： PCR技術(shù) 生物芯片技術(shù) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù) 免疫學(xué)方法就是通過實驗證實機體免疫反應(yīng)的過程 。 基本參與單位有：抗原 抗體 免疫細(xì)胞和免疫分子 第二節(jié) 體液免疫學(xué)方法 一 、 抗原制備 1. 天然抗原制備 (1)粗抗原的提取：凍融法 、 冷熱交替法 、 超聲法 (12HE) (2)粗抗原純化： ? 選擇性沉淀法：鹽析沉淀法 、 核酸沉淀法 ? 凝膠過濾和離子交換層析 ? 親和層析法 ? 蛋白電泳 2. 合成抗原制備 化學(xué)合成高分子氨基酸聚合物 ， 即多肽 。 合成肽與載體蛋白連接后能有效誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生免疫應(yīng)答 常用方法： tea bag method 純化方法：反向高效液相色譜法 二 、 抗體制備 1. 多克隆抗體制備 (polyclonal antibody) 多克隆抗體是指在自然免疫或免疫動物后產(chǎn)生的具有不同特異性和親和性的多種抗體混合分子 。 具有抗多種不同抗原的表位 。 2. 單克隆抗體制備 (monoclonal antibody) 單克隆抗體是指由一個識別一種抗原表位的 B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體 。 產(chǎn)生方法： B細(xì)胞克隆與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞 3. 基因工程抗體 (engineer antibody) 應(yīng)用抗體庫技術(shù)產(chǎn)生 方法：將某種動物所有
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