蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法-展示頁
2025-01-29 11:39本頁面
【正文】 00毫升容量瓶 2只；移液管 1毫升 4支， 5毫升 2支；分光光度計(jì)。最后根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品中蛋白質(zhì)的含量。 該呈色反應(yīng)在 30分鐘內(nèi)即接近極限，并且在一定濃度范圍內(nèi)，藍(lán)色的深淺度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系，故可用比色的方法確定蛋白質(zhì)的含量。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 蛋白質(zhì)中含有酪氨酸和色氨酸殘基，能與 Folin酚試劑起氧化還原反應(yīng)。 ，加入濃硫酸，硫酸鉀和硫酸銅粉末的目的是什麼？ ？ 實(shí)驗(yàn) 蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 Folin 酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理。【 實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí) 】 Folin酚法與考馬斯亮藍(lán)染料結(jié)合比色法的優(yōu)缺點(diǎn)。 2 .試比較二喹啉甲酸法與 Folin酚法的優(yōu)缺點(diǎn)。 Folin酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法和操作。反應(yīng)過程分為兩步，第一步：在堿性溶液中，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵與堿性銅試劑中的 Cu2+作用生成蛋白質(zhì) Cu2+復(fù)合物；第二步：蛋白質(zhì) Cu2+復(fù)合物中所含的酪氨酸或色氨酸殘基還原酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸，生成藍(lán)色的化合物。進(jìn)行測(cè)定時(shí)要根據(jù)蛋白質(zhì)濃度的不同選用不同的測(cè)定波長(zhǎng)：若蛋白質(zhì)含量高時(shí)（ 25100μg）在 500nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，含量低時(shí) (525μg)在 755nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定。 Folin酚試劑法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，樣品中蛋白質(zhì)含量高于 5μg即可測(cè)得，是測(cè)定蛋白質(zhì)含量應(yīng)用得最廣泛的方法之一。 (1)Fo1in酚試劑甲：將 lg碳酸鈉溶于 ／ L氫氧化鈉溶液中，再把 (CuSO4?5H2O)溶于 100mL1％酒石酸鉀 (或酒石酸鈉 )溶液，然后將前者 50mL與后者 lmL混合。 (2)Folin酚試劑乙：在 100g鎢酸鈉(Na2WO4?2H2O)、 25g鉬酸鈉 (Na2MoO4?2H2O)、 700mL蒸餾水、 50mL85％磷酸及 100mL濃鹽酸，充分混勻后回流 10h。過濾，如顯綠色，可加溴水?dāng)?shù)滴使氧化至溶液呈淡黃色。 【 實(shí)驗(yàn)材料 】 使用 前用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定， 酚酞 為指示劑，以標(biāo)定該試劑的酸度，一般為 2mol／ L左右 (由于濾液為淺黃色，滴定時(shí)濾液需稀釋 100倍，以免影響滴定終點(diǎn)的觀察 )。 (3)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：用分析天平精密稱取牛 (或人 )血清白蛋白 100毫克，用少量蒸餾水完全溶解后，轉(zhuǎn)移至 100毫升容量瓶中，準(zhǔn)確稀釋至刻度，使蛋白質(zhì)濃度 1mg/mL。 【 實(shí)驗(yàn)操作 】 1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取 7支試管，按下表分別加入各試劑 各管
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