免疫標(biāo)記技術(shù)ppt課件-展示頁
2024-11-12 17:36本頁面
【正文】 ? 固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標(biāo)本，最后加標(biāo)記抗體，測定固相載體的放射性活性。 ? 非標(biāo)記抗原含量與標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物的量成一定函數(shù)關(guān)系。 ? 在反應(yīng)系統(tǒng)中，待檢標(biāo)本的胰島素抗原與放射性核素標(biāo)記的胰島素競爭性結(jié)合。 ? 可進(jìn)行超微量分析，敏感性高，特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確性好，可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復(fù)合物。 ? 但不能觀察組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)，標(biāo)本不能永久保存，熒光有自然消退現(xiàn)象，需及時(shí)觀察及時(shí)照相；在實(shí)驗(yàn)中容易有非特異性熒光干擾。 ? 缺點(diǎn)是參與反應(yīng)的成分多，染色程序較復(fù)雜，操作較麻煩。 ? 該法優(yōu)點(diǎn)與間接法相同，且只需一種標(biāo)記抗補(bǔ)體抗體，便能檢測各種抗原 抗體系統(tǒng)。 ? 如果第一步中抗原抗體發(fā)生反應(yīng)，形成復(fù)合物，則補(bǔ)體被抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。利用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的原理，用熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體抗體，鑒定未知抗原或未知抗體（待檢血清）。 ? 缺點(diǎn)是，由于參加反應(yīng)的因素較多，受干擾的可能性也較大，判斷結(jié)果有時(shí)較難，對照較多，時(shí)間長。 ? 間接染色法：如果檢查組織或細(xì)胞上的未知抗原，可將抗原直接與相應(yīng)抗體（不標(biāo)記熒光）結(jié)合，此為第一抗體，作用一定時(shí)間后，洗去未反應(yīng)的抗體，再把能與第一抗體特異結(jié)合有熒光標(biāo)記的抗抗體即免疫球蛋白抗體（第二抗體）加入，如果第一步中的抗原抗體互相發(fā)生了反應(yīng)，則抗體被固定，并與第二步加入的熒光素標(biāo)記的抗抗體結(jié)合，形成抗原 抗體 抗抗體復(fù)合物，再洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗抗體，在熒光顯微鏡下可見熒光。 直接免疫熒光 ? 可用于病毒感染細(xì)胞、帶某種特異抗原的細(xì)胞（如T細(xì)胞和 B細(xì)胞）或病原體的檢查；也可用于組織者沉著的免疫復(fù)合物檢查。 ? 此技術(shù)是用不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記抗體（或抗原），再與組織或細(xì)胞中的相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，通過熒光反應(yīng)檢測抗原抗體的一種技術(shù)。 ? 本方法可用于定性、定量或定位檢測。免疫標(biāo)記技術(shù) 主要內(nèi)容 ? 免疫熒光技術(shù) ? 放射免疫分析法 ? 酶免疫分析法 ? 免疫印跡法 用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng) ? 用熒光素、放射性核素或酶標(biāo)記的抗體或抗原是目前廣泛應(yīng)用的敏感可靠的方法。 ? 上述三種常用的標(biāo)記物與抗原或抗體化學(xué)連接之后不改變后者的免疫特性。 ? 免疫熒光技術(shù)（ Immunofluorescence technique） ? 又稱熒光抗體技術(shù)，是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。 ? 三種方法 ? 直接染色法：將標(biāo)記的特異熒光抗體直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定溫度和時(shí)間染色，洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體，在熒光顯微鏡下見到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結(jié)合物而發(fā)出的熒光。 ? 優(yōu)點(diǎn)是特異性高，操作簡便，比較快速 ? 缺點(diǎn)是檢查多種抗原，需分別制備相應(yīng)的多種標(biāo)記抗體。 間接免疫熒光 ? 間接染色法克服直接法需制備多種熒光素標(biāo)記抗體的復(fù)雜操作，用一種標(biāo)記的抗球蛋白抗體就能與種屬相同的所有動物的抗體結(jié)合，檢查各種未知抗原或抗體，且敏感性高。 ? 抗補(bǔ)體染色法：簡稱補(bǔ)體法，是間接染色法的一種改良法。染色程序分為兩步： ? 先將未標(biāo)記的抗體和補(bǔ)體加在抗原標(biāo)本上，使其發(fā)生反應(yīng)，水洗，再加標(biāo)記的抗補(bǔ)體抗體。第二步加入的熒光素標(biāo)記的抗補(bǔ)體抗體便與補(bǔ)體發(fā)生特異性反應(yīng)，使之形成 抗原 抗體 補(bǔ)體 抗補(bǔ)體抗體復(fù)合物，發(fā)出熒光。因?yàn)檠a(bǔ)體的作用沒有特異性，可與任何哺乳動物的抗原 抗體系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)。 技術(shù)特點(diǎn) ? 免疫熒光技術(shù)將抗原和抗體的特異性與形態(tài)學(xué)檢查結(jié)合，能實(shí)現(xiàn)快速、敏感、定位。 ? 放射免疫分析法 （ radio immunoassay，RIA） ? 放射免疫分析法應(yīng)用
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