【正文】 s, this malignancy has a grim prognosis even following surgical resection and has high diseaserecurrence. Surgery is the first and most mon therapy of HCC. Unfortunately, the disease is usually detected at an advanced stage, and the major patients lose the chance of surgery, die within 1year after the diagnosis of their disease. Relative survivor are 30% and 30%~40% respectively. The high disease recurrence and metastasis are the important reasons for effect and prognosis. Curative therapies are least effective for surgically cases. For these patients, medical treatments, including chemotherapy, chemoembolization, ablation, radiotherapy, remain disappointing. Clearly, there is an urgent need for new therapies for this aggressive disease because effective prevent and targets of therapy are unavailable. Therefore this issue is the mechanism of the Joint Drug B, Drug A, on HepG2 cells is significant. This article assessed the effects of drug A alone, drug B alone and bination of drug A and drug B on HepG2 cells with MTT assay, suggesting that A and B have a maximal binational effect at the dose of A 6μ mol/L and B 100μ mol/L ,respectively. Western Blotting analysis indicates that proapoptosis proteins include BAX and FADD are increasing and antiapoptosis protein BCL2 is reducing. Keyword Combination, apoptosis, the mechanism of action 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 第一章 緒論 3 第一章 緒論 細胞凋亡 細胞凋亡定義、意義、形態(tài)學特征、作用通路、機理 立題依據(jù) 先介紹下腫瘤的危害，再介紹下肝癌 HCC（ hepatic cell carcinoma)的危害。流式細胞儀檢測細胞凋亡率顯示，聯(lián)合用藥組凋亡率升高更為明顯。 本實驗首先用 MTT 法分別測得不同濃度的 A 和 B 單獨處理 HepG2 細胞及不同濃度的 A和 B 聯(lián)合用藥處理 HepG2 細胞 死亡的影響 。傳統(tǒng)的化療、放療對肝癌療效欠佳，目前仍缺乏行之有效的化學預防和治療靶位 [1]。目前 肝癌仍以外科手術(shù)為公認首選和主要的治療手段，但由于很多肝癌患者確診時已是中晚期，失去了手術(shù)治療的機會并于診斷后 1 年內(nèi)死亡，手術(shù)切除率 30%，術(shù)后總體 5 年生存率僅 30%~40%。 21致謝 12 第 3 章 結(jié)論與討論 7 實驗結(jié)果 6 實驗材料 5 第 2 章 實驗部分 3 細胞凋亡 2 第 1 章 緒論 1英文摘要 沈 陽 藥 科 大 學 本 科 畢 業(yè) 論 文 論文題目：化合物 A聯(lián)合 化合物 B對人肝癌 HepG2 細胞作用機制研究 起止時間： 2021 年 10月 26日 — 2021年 6月 20日 姓名學號： 學院專業(yè)： 年級班級： 指導教師： XXX 副教授 實習單位： XXX大學生命科學與生物制藥學院藥理系 2 目 錄 中文摘要 3 立題依據(jù) 6 實驗方法 17 結(jié)論 17 討論 18 參考文獻 23 沈陽藥科大學本科畢業(yè)論文 目錄 3 摘 要 原發(fā)性肝癌是世界常見的惡性腫瘤之一，也是我國的高發(fā)惡性腫瘤，由于不易被早期診斷，進展迅速，術(shù)后容易復發(fā)、轉(zhuǎn)移，因此預后較差。對于可手術(shù)的肝癌患者，術(shù)后復發(fā)、轉(zhuǎn)移是影響治療效果及預后的主要因素，對于不能手術(shù)的中晚期肝癌患者尚缺乏有效的治療方法。因而本課題是對化合物 A 聯(lián)合化合物 B 對人肝癌 HepG2 細胞作用機制研究。結(jié)果表明 不同濃度的 A 和 B 單獨處理 HepG2 細胞，增值抑制程度表現(xiàn)為時間劑量依賴效應(yīng)，并且在 A 6μ mol/L 聯(lián)合 B 100μ mol/L 協(xié)同作用最為顯著 。 Western Blot法檢測蛋白顯示，促凋亡相關(guān)蛋白 Bax、 FADD 增加，抗凋亡蛋白 Bcl2 表達減少。 雖然有些臨床治療藥物具有一定的療效，但同時也會加重肝臟的損害。 藥物 A是一種獨特的多靶點抗腫 瘤藥物，既抑 制腫瘤細胞增殖又抑制了腫瘤血管的形成，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。 Drug A 具有抑制腫瘤細胞增殖和血管形成的雙重作用 , 即它一方面可以抑制受體酪氨酸激酶 KIT 和FLT3 以及 RAF/MEK/ ERK 途徑中絲氨酸 / 蘇氨酸激酶 , 抑制腫瘤細胞增生 。因此它可以起到抗腫瘤血管生成和抑制腫瘤細胞增值的雙重作用。 藥物 B 能夠抑制腫瘤受體型酪氨酸激酶 (receptor t yrosine kinase, RTK) 的活性，包括表皮生長因子受體 1(epidermal growth factor receptor 1, EGFR) 和胰島素樣生長因子 1 受體 (insulinlike growth fact or 1 receptor , IGF1R) 及其下游信號分子的活化。研究表明，藥物 B 有明顯的保護和穩(wěn)定肝細胞的作用，用于治療急慢性肝炎、肝硬化、肝中毒等病。在臨床上的應(yīng)用為對肝臟的保護作用。 第二章 實 驗部分 實驗材料 一、細胞 人肝癌 HepG2 細胞購于 American Type Culture Collection (ATCC， Rockville， MD， USA)。 二、藥品及試劑 Drug A、 Drug B 于無菌條件下， DMSO 溶解后，用 1640 培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。 抗 pERK、 ERK和 β actin 的 抗體，及辣根過氧化酶標記的二抗，購于美國 Santa Cruz Biotechnology 公司 （ Santa Cruz, CA, USA） 。 實驗方法 一、不同濃度的 Drug A 和 Drug B 單獨處理 HepG2 細胞及 Drug A 和 Drug B 聯(lián)合用藥處理HepG2 細胞 死亡的影響 四甲基偶氮唑 [3(4,5dimethylibiazol2yl)2,5diphenyltetr