【正文】 燕山大學畢業(yè)設計（論文）任務書 學院：里仁學院 系級教學單位： 建環(huán)系 學 號 091610021037 學生 姓名 李寧 專 業(yè) 班 級 應用化學 092 班 題 目 題目名稱 奶制品氮含量測定技術的研究 題目性質 ：工程設計 （ ）；工程技術實驗研究型（ √ ）； 理論研究型（ ）；計算機軟件型（ ）；綜合型（ ） （ ）； （ ）； （ ） 題目類型 （ ） （ √ ） 題目來源 科研課題 （ ） 生產(chǎn)實際 （ ） 自選題目 （ √ ） 主 要 內 容 利用凱氏定氮法，雙縮脲法， 考馬斯亮藍法以及反相高效液相色譜法對牛奶以及摻雜尿素和三聚氰胺的牛奶進行檢測，對比分析這幾種方法的優(yōu)缺點， 從中找出最適合的蛋白質測定的方法 。 基 本 要 求 掌握各種檢測方法的基本原理，明確每種檢測方法的基本內容，熟練掌握分光光度計，高效液相色譜儀等儀器的使用方法。 實驗階段，用凱氏定氮法、 Bradford法、雙縮脲法和反相高效液相色譜法測定牛奶及摻雜的牛奶進行檢測分析。 分析比較幾種方法，并提出自己的看法。 指導教師：李阿丹 系級教學單位審批： 年 月 日 職稱： 副教授 20xx 年 6 月 16 日 摘要 I 摘要 本文采用凱氏定氮法，雙縮脲法，考馬斯亮藍法以及反相高效液相色譜法分別對牛奶以及摻入尿素和三聚氰胺的牛奶樣品進行實驗分析 ，并對幾種方法測得的進行比較 。高效液相色譜法是用的反相色譜法，使用 ZORBAX300SBC18色譜柱（ 250 mm mm， 5 μm）和紫外檢測器，用標準添加法對純牛奶樣品中的尿素和三聚氰胺的含量進行了檢測分析。用雙縮脲法和考馬斯亮藍法要比凱氏定氮法簡便迅速，并且這兩種方法也都可以快速準確的檢測出蛋白質的含量。 關鍵詞 牛奶蛋白質；凱氏定氮法；雙縮脲法；考馬斯亮藍法；反相高效液相色譜法；有機溶劑沉淀法 燕山大學本科生畢業(yè)設計（論文） II Abstract In this paper, the Kjeldahl method, biuret method, Coomassie brilliant blue method and high performance liquid chromatography(HPLC), respectively, for milk and milk mixed with urea and melamine test samples analyzed and measured by several methods for parison. In the biuret method and Coomassie brilliant blue method for sample pretreatment of choice is an anic solvent precipitation method using acetonitrile extract the protein in milk. HPLC with reversedphase chromatography using ZORBAX300SBC18 column (250 mm mm, 5 μm) and a UV detector, using standard addition method for pure milk sample content of urea and melamine the detection and analysis. Through analysis and parison of results shows that, with the Kjeldahl nitrogen content measured by the total nitrogen content of the milk, the method consumes a long time and plicated operation. With the biuret method and Coomassie blue staining than Kjeldahl method is simple and rapid, and these two methods can also be quickly and accurately detect the protein content. By reversedphase highperformance liquid chromatography peaks when the sample in place will not be interference from other ponents in milk, it can be used in dairy products of urea and melamine accurate detection and analysis. Keywords Kjeldahl method。 Bradford method。 anic solvent precipitation III 目 錄 摘要 ....................................................................................................................... I Abstract ................................................................................................................ II 第 1 章 緒論 ........................................................................................................ 1 課題背景 ............................................................................................... 1 蛋白質測 定方法概述 ........................................................................... 2 凱氏定氮法 ................................................................................... 2 雙縮脲法 (Biuret 法 ) ..................................................................... 3 福林 酚試劑法（ Lowry 法 ） ...................................................... 5 考馬斯亮藍法（ Bradford 法） .................................................... 6 高效液相色譜法（ HPLC） ......................................................... 7 課題研究的意義 ................................................................................... 8 課題研究的主要內容 ........................................................................... 9 第 2 章 實驗材料及方法 .................................................................................. 10 用凱氏定氮法測定牛奶中的蛋白質含量 ......................................... 10 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 10 實驗操作及步驟 ......................................................................... 10 雙縮脲法測定牛奶中的蛋白質含量 ................................................. 12 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 12 實驗操作及步驟 ......................................................................... 12 考馬斯亮藍法測定牛奶中的蛋白質含量 ......................................... 15 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 15 實驗操作及步驟 ......................................................................... 15 反相高效液相色譜法測定牛奶中的三聚氰胺及尿素的含量 ......... 18 實驗儀器及藥品 ......................................................................... 18 實驗操作及步驟 ......................................................................... 18 第 3 章 實驗結果與分析 .................................................................................. 21 凱氏定氮法的實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ......................................... 21 IV 實驗數(shù)據(jù)及處理 ..........................................................................21 實驗結果及分析 ..........................................................................22 雙縮脲法的實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ..............................................22 樣品摻雜處理中所需尿素和三聚氰胺溶液的濃度計算 ..........22 標準蛋白曲線的繪制 ..................................................................22 雙縮脲法對摻雜尿素溶液的未知樣品溶液中的蛋白質含量的測定 .....................................................................................................................23 雙縮脲法對摻雜三聚氰胺的未知樣品溶液中的蛋白質含量的測定 .....................................................................................................................25 考馬斯亮藍法的 實驗數(shù)據(jù)處理及結果分析 ......................................26 樣品摻雜處理中所需尿素和三聚氰胺溶液的濃度計算 ..........26 標準蛋白曲線的繪制 ..................................................................26 考馬斯亮藍法對摻雜尿素的未知樣品溶液中的蛋白質含量的測定 ......................................................................................................