word微生物常規(guī)鑒定技術(shù)-展示頁
2024-09-16 09:58本頁面
【正文】 起，每日取培養(yǎng)液 1ml，加甲基紅指示劑 1~2 滴，陽性呈鮮紅色，弱陽性呈淡紅色，陰性為黃色。 C 或 30176。 試驗方法：挑取新的待試純培養(yǎng)物少許，接種于 MR－ VP 生化鑒定管，于 36通用培養(yǎng)基，培養(yǎng)于 36177。 4． 注意事項：過氧化氫酶是 1 種以正鐵血紅素作為輔基的酶，所以測試菌所生長的培養(yǎng)基不可含有血紅素或 紅血球。 3． 試驗方法：取一干凈的載波片，在上面滴 1 滴 3－ 10％的 H2O2，挑取 1環(huán)培養(yǎng) 18－ 24h 的菌苔，在 H2O2溶液中涂抹，若有氣泡（氧氣）出現(xiàn)，則為過氧化氫酶陽性，無氣泡者為陰性。 過氧化氫酶的測定 過氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過氧化氫分解水和氧。 （ 2） 鐵、鎳鉻絲等金屬可催化二甲基對苯撐二胺呈紅色反應(yīng)，若用它來挑取菌苔，會出現(xiàn)假陽性，故必須用白金絲或玻璃棒（或牙簽）來挑取菌苔。應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)判定試驗結(jié)果。 試 驗方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或血瓊脂平板菌落上滴加試劑 1~2 滴，陽性者 Kovacs 氏試劑呈粉紅色 ~深紫色， Ewing 氏改進試劑呈藍色。培養(yǎng) 2， 4 和 24h 分別觀察結(jié)果，如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至 4 天，作最終判定，變?yōu)榉奂t色為陽性。 1℃培養(yǎng) 10， 60 和 120min，分別觀察結(jié)果。其活性最適 pH 為 。 微生物檢驗中常用的生化反應(yīng)有： 尿素酶（ Urease）試驗 有些細菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生 2 個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。 ② 看后的染色 玻 片用 廢紙將香柏油 擦干 Aseptic technique: Streak plate: Pour plate Spread plate Th e m eth od of a serial d ilut ion s f or viab le coun tin g 二、生理生化試驗 微生物生化反應(yīng)是指用化學(xué)反應(yīng)來測定微生物的代謝產(chǎn)物，生化反應(yīng)常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。 擦鏡紙將鏡頭擦 2— 3 次。 （ 13）實驗完畢后的處理： ① 將浸過 油的鏡頭按下述方法擦拭干凈， 擦鏡紙將 油鏡頭上的油擦去。 （ 11）晾干： 將染好的 涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。 （ 9） 復(fù)染 ：滴加 蕃紅復(fù)染 5min。 （ 7）水洗：用水洗 去碘液 。 （ 5）水洗： 傾去染色 液，用水小心地沖洗。 （ 2）晾干：與簡單染色法相同。 G— 菌的 細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且 肽 聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和 碘的 復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細菌就被脫色，再經(jīng) 蕃紅復(fù)染后就成紅色。革蘭氏染色法可將所有的細菌 區(qū)分為革蘭氏 陽性菌（ G+）和 革蘭氏 陰性菌（ G— ）兩大類，是細菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。霉菌在固體培養(yǎng)表面形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。霉菌有分支的絲狀體，菌絲粗長， 在條件適宜的培養(yǎng)基里，菌絲無限伸長沿培養(yǎng)基表面蔓延。 ２）霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征 ： 大多數(shù)酵母菌沒有絲狀體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細菌的很相似，只是比細菌菌落大且厚。在液體培養(yǎng)中的表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。因此 ，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特征有很大差異，而同一種的細菌在一定條件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。微生物常規(guī)鑒定技術(shù) 一、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察 １、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結(jié)構(gòu)（包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進行觀察，直觀地了解細菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達到區(qū)別、鑒定微生物的目的。 ２、細菌細胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細胞群體叫菌落（ colony）。以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。 １）細菌的培養(yǎng)特征包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。液體培養(yǎng)也和細菌相似，有均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正面和背面顏色常常不同，如青霉菌：孢子青綠色，氣生菌絲無色，基內(nèi)菌絲褐色。 革蘭氏染色 : 革蘭氏染色法是 1884 年 由丹麥病理學(xué)家 所創(chuàng)立的。 該染色法所以能將細菌分為 G+菌和 G— 菌 ，是由這兩類菌的細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。 G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而 使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色 步驟 ： （ 1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。 （ 3）固定，與簡單染色法相同 （ 4）結(jié)晶紫色染色：將 玻 片置于廢液缸 玻 片擱架上，加適量（以蓋滿細菌涂面）的結(jié)晶紫染色液染色 1 分鐘。 （ 6） 媒染 ： 滴加盧哥氏碘液，媒染 1min。 （ 8）脫色：將 玻 片傾斜， 連續(xù)滴加 95%乙醇脫色 20— 25s 至流出液無色，立即水洗。 （ 10）水洗：用水洗去涂片上的 蕃 紅染色液。 （ 12）鏡檢：鏡檢時先用低 倍 ，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應(yīng)性。 擦鏡紙沾 少許二甲苯將鏡頭擦 2— 3 次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。因此微生物生化反應(yīng)是微生物分類鑒定中的重要依據(jù)之一。尿素酶不是誘導(dǎo)酶，因為不論底物尿素是 否存在，細菌均能合成此酶。 試驗方法：挑取 18~24h 待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中，搖均，于 36177?；蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面，不要到達底部，留底部作變色對照。 氧化酶（ Oxidase）試驗 氧化酶亦即細胞色素氧化酶，為細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細胞色素 C 氧化，然后此氧化型細胞色素 C 再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。陰性者無顏色改變。 注意事項： （ 1） 鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液容易氧化，溶液應(yīng)裝在棕色瓶中，并在冰箱內(nèi)保存，如溶液變?yōu)榧t褐色，即不宜使用。 （ 3） 在濾紙上滴加試劑，以剛剛打濕濾紙為宜，如濾紙過濕，會防礙空氣與菌苔接觸，從而延長了反應(yīng)時間， 造成假陰性。 1． 試劑： 3－ 10％過
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