【正文】 品加到平板中央（ ）；玻璃三角涂棒浸入酒精；沾有酒精的涂棒在火焰上灼燒后使其冷卻；無菌涂棒將樣品均勻涂布瓊脂培養(yǎng)基表面，適當(dāng)條件下培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基分離法168。平板傾注法168。涂布平板法168。n 獲得純培養(yǎng)物 對微生物學(xué)研究至關(guān)重要。 平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)、分離純化菌種，以及活菌計數(shù)等；n 平板接斜面：平板分散的單菌落接于斜面；n 斜面接平板：點種法、劃線法。 此法用于厭氣性細菌接種，檢查細菌的運動能力。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 三、微生物接種和培養(yǎng)n 穿刺接種168。 塞上棉塞，輕輕搖動均勻；168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)n 液體接種168。 用右手的小指、無名指和手掌拔下棉塞并夾緊，同時將管口在火焰上灼燒；168。 左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平；168。 平板接種 液體接種252。q 接種工具 q 微生物接種技術(shù)分類252。屬（ Genus）168。目（ Order）168。門（ Phylum）168。n 分類等級168。 核酸序列多相分類Polyphasic Texonomy Technology醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類 微生物的分類等級n “種 ”是微生物分類中最基本的分類單元。 蛋白質(zhì)比較168。 生理和代謝特征168。 細胞器：n 線粒體n 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)n 高爾基體n 液泡醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 n 原核生物一、微生物分類醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 n 真核生物一、微生物分類醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類 多相分類n 表征（表型）特征168。 可利用多種碳源(Rhodospirillum)168。棒狀 (Escherichia coli)n 球型 mm168。 大小 :微生物基本操作技術(shù)中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心 CICC姚 粟醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 內(nèi) 容n 微生物分類n 微生物接種和培養(yǎng)n 微生物的分離n 微生物的鑒定n 微生物保藏n 質(zhì)控微生物醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類 微生物的進化和多樣性普遍性系統(tǒng)發(fā)育樹 ,親緣關(guān)系根據(jù) rRNA序列比較來決定。G. J. Olsen and C. R. Woese, ‘Ribosomal RNA: A key to Phylogeny’ in the FASEB Journal, 7:113123,1993醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 一、微生物分類n 原核生物168。 形狀 :n (Sthaphylococcus)n 螺旋 生長迅速， 20min至幾小時可繁殖一代168。n 真核生物168。 形態(tài)特征168。 生態(tài)特征n 遺傳（基因型）特征168。 核酸堿基組成168。n “種 ” 的定義：一個種（基因型種）是有相似 G+C組成并通過 DNA雜交試驗判斷由 70%或更大相似性的菌株的集合。界（ Domain）168。綱（ Class）168?？疲?Family）168。種（ Species）醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)q 微生物接種定義 將微生物的純種或含菌材料（如水、食品、空氣、土壤、排泄物等）轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上，這個操作過程叫微生物的接種。 斜面接種252。 穿刺接種252。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)n 斜面接種168。 右手先將棉塞（硅膠塞）擰轉(zhuǎn)松動，再拿接種環(huán)；168。 接種環(huán)灼燒滅菌后插入試管內(nèi)，冷卻、挑菌，轉(zhuǎn)入另一斜面底部，沿斜面劃曲線或直線。 操作方法與斜面接種基本一致，只是將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基中時使接種環(huán)與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散；168。 如果菌種培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中，使用移液管或滴管接種。 用接種針調(diào)取菌種后，插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)（不要刺到底部），再沿原路拔出；168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)n 平板接種168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 二、微生物接種和培養(yǎng)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 三、微生物分離醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)n 純培養(yǎng)物 是指來源于同一單細胞的細胞群體。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)168。平板劃線法168。稀釋搖管法168。單細胞（孢子）分離法168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 涂布平板法樣品需適當(dāng)稀釋 30300CFU/mL醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 平板劃線法168。曲線法168。放射法168。角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和第四次平行劃線。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 平板劃線法血瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌（大的金黃色菌落）醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 平板傾注法對起始樣品進行連續(xù) 10倍稀釋，將高稀釋倍數(shù)的樣品與冷卻至適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌平皿后混合均勻，培養(yǎng)后獲得單菌落。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 稀釋搖管法n 適合厭氧菌的純培養(yǎng)分離無菌瓊脂培養(yǎng)基試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在 50℃ 左右 搖勻、冷凝在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 液體培養(yǎng)基分離168。168。168。 單細胞（或單孢子）分離法是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。 較大的微生物 ，可采用毛細管提取單個個體。 個體相對較小的微生物 ，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養(yǎng) 168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 選擇培養(yǎng)基分離n 選擇培養(yǎng)基特性168。抑制能力168。 傳統(tǒng) 選擇性培養(yǎng)基n 血平板： 適于各類細菌的生長，一般細菌檢驗標(biāo)本的分離，都應(yīng)接種此平板。n 中國藍平板或伊紅美藍平板： 可抑制 G+細菌，有選擇地促進 G菌生長，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。n SS瓊脂： 有較強的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 選擇培養(yǎng)基分離n 新型 顯色培養(yǎng)基168。Organism Enzyme Substrate Color Coliforms βgalactosidaseXGAL BlueβGlucuronidase MUG fluorescenceEscherichia coli O157βgalactosidaseXGAL Blue醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 選擇培養(yǎng)基分離醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 基于酶與底物反應(yīng)的顯色培養(yǎng)基技術(shù)n CHROMagar醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務(wù)與潔凈室管理，北京， 2023 n Petrifilm3MAerobic Count Plate Coliform Count Plate Rapid Coliform