20xx年醫(yī)學專題—雙染法檢測細胞凋亡-文庫吧資料
2024-11-17 22:20本頁面
【正文】 到了。2. 建立LogFL1LogFL2（最好用FL3）雙參數(shù)點圖并分析以上光散射圖中設(shè)門的細胞；保證98%的細胞處于在X、Y 軸Log 1 為邊界的左下象限中心區(qū)域。 根據(jù)未處理細胞空白對照和經(jīng)Annexin V、PI 分別細胞染色后的單染對照的分析設(shè)定十字門的位置。建議在實驗開始階段分析經(jīng)Annexin V、PI 分別單染的細胞來調(diào)整熒光補償去除光譜重疊。使用流式細胞儀正確分析Annexin VEGFP/PI 雙染的細胞前要求儀器的熒光補償來去除兩種染料激發(fā)光之間的疊加。 流式細胞儀激發(fā)光波長采用Ex.= 488nm雙波長激發(fā)，Em.= 510 nm檢測EGFP熒光(FL1 channel)和575 nm的發(fā)射檢測PI。C 避光條件下孵育5分鐘。C 避光條件下孵育15分鐘。3. 用400ul 1X Binding Buffer 懸浮細胞，濃度大約為1 X 106 cells/ml。（貼壁細胞用不含EDTA的胰酶消注意：Annexin VEGFP和碘化丙啶染液應(yīng)該避光存放和使用。因此將AnnexinV 與PI 匹配使用，就可以將亡早
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