20xx年醫(yī)學專題—mtt法檢測細胞活力講解-文庫吧資料
2024-11-04 12:59本頁面
【正文】 的最明顯）。切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。一定要多看文獻，參考別人的結(jié)果再定個比較大的范圍先初篩。 d236。,第十四頁，共二十四頁。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細胞數(shù)呈的線性關(guān)系。這樣，才能(c225。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細胞長滿時約有105個細胞。ngqu232。,第十三頁，共二十四頁。 2． 設(shè)空白對照，與試驗平行設(shè)不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照孔。在進行MTT試驗前，對每一種細胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線(qūxi224。代入 計算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=lg0.1=1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=11*(3.1(30.950.06)/4)=3.6025 IC50=0.00025,第十二頁，共二十四頁。ngd249。,舉例(jǔ l236。xi224。 OD對照組OD實驗組 抑制率 % = OD對照組,100 %,第十頁，共二十四頁?？梢砸詴r間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細胞生線曲線，專門公式求IC50（半數(shù)抑制濃度 ）。ngy242。n)結(jié)果統(tǒng)計學處理,所有數(shù)值以x177。,實驗(sh237。 MTT有致癌性，用的時候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關(guān)系，因為時間較短。)黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。C避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在20度長期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是(hu242。izh236。)的配制,濃度 體積(tǐjī) 過濾,第八頁，共二十四頁。,藥物(y224。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm測量各孔的吸光值。x249。 2）置37℃，5%CO2孵育24小時，倒置顯微鏡下觀察。每板設(shè)對照。nf 7.同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）,第六頁，共二十四頁。)振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。 5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。,4. 每孔加入10
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