20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測細(xì)胞活力講解-資料下載頁
2024-11-04 12:59本頁面
【正文】 (rguǒ)是懸浮細(xì)胞，則推薦此法,懸浮細(xì)胞要離心2500rpm10min.且其做MTT最好用圓底型96孔板,清除上清時(shí)注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉,建議各孔吸棄150160ul即可)。 翻轉(zhuǎn)倒扣法：可以直接將板翻轉(zhuǎn)倒扣（墊幾層濾紙）2－3次，比用“吸”的辦法更不容易使細(xì)胞脫離出來。可以輕拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，但前提是細(xì)胞貼壁要比較牢。,第二十頁，共二十四頁。,加入(jiār249。)DMSO,在同一批實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)中最好不要更換DMSO。加DMSO前把孔中液體盡量棄干凈如果培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測時(shí)可以盡量去除培養(yǎng)液的影響，DMSO的量也可為100ul或150ul. 加了DMSO后用振蕩器輕輕振蕩5－10min, 時(shí)間控制盡量嚴(yán)格一點(diǎn),放置時(shí)間長了會(huì)影響結(jié)果,值會(huì)偏大,且結(jié)果不可信. 加入DMSO溶解后盡快檢測。,第二十一頁，共二十四頁。,OD值的測定(c232。d236。ng),至于測定波長(bōch225。ng)的選擇是因顯色溶液而異的。對于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值 。 DMSO溶后10分鐘內(nèi)測，越放顏色越深，而ＳＤＳ做為溶解液測吸收光值，其值可在三天內(nèi)保持不變。 細(xì)胞密度偏大測出的吸光度也會(huì)偏大，細(xì)胞密度小吸光度也會(huì)偏??；另外跟細(xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會(huì)低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時(shí)間短，OD值也會(huì)偏低。如果各個(gè)孔的孔間差異性特別明顯的話說明有可能存在污染,空白孔的OD值太高，很可能是細(xì)菌污染。,第二十二頁，共二十四頁。,謝謝(xi232。 xie)觀看,第二十三頁，共二十四頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),MTT法檢測細(xì)胞活力。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。所有數(shù)值以x177。s表示(biǎosh236。)，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，p0.05時(shí)為相差顯著，p0.01時(shí)為相差非常顯著。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對每一種細(xì)胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間。由于試驗(yàn)本底增加，會(huì)試驗(yàn)敏感性。謝謝觀看,第二十四頁，共二十四頁
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