細(xì)胞增殖mtt檢測經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-文庫吧資料
2025-03-29 12:03本頁面
【正文】 沉到板底了，這時(shí)在顯微鏡下觀察，推測哪個(gè)孔的細(xì)胞48 h能基本長滿板底，假設(shè)50微升的孔比較合適，而點(diǎn)板時(shí)沒孔需點(diǎn)200 微升，那么就將細(xì)胞濃度再稀釋4倍就可以正式點(diǎn)板了，這時(shí)順便將細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)（因?yàn)閷?shí)驗(yàn)記錄要求寫?。．?dāng)然可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行修改。二、MTT法檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)培養(yǎng)好細(xì)胞點(diǎn)板養(yǎng)細(xì)胞沒啥好說的，如果不知道細(xì)胞如何養(yǎng)，那就看看相關(guān)的文獻(xiàn)方法。一、MTT的原理活細(xì)胞有琥珀酸脫氫酶，將MTT還原成棕褐色沉淀。一般腫瘤細(xì)胞系空白處理的調(diào)亡率應(yīng)低于1%，用藥后一般為510%（Annexin V），細(xì)胞周期的亞G0峰比較明顯。一般要低于IC50，避免非調(diào)亡性殺傷的細(xì)胞太多，造成流式細(xì)胞儀檢測碎片太多。要點(diǎn)：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點(diǎn)線圖即可！三、舉例、稀釋倍數(shù)為10，、。，超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系，IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的時(shí)候藥物的濃度。設(shè)空白對照：與試驗(yàn)平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照。避免血清干擾：一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗(yàn)。比色選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。呈色培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配），終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。一、步驟接種細(xì)胞用含10%胎
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