光度測(cè)定法bet檢查技術(shù)-文庫(kù)吧資料
2025-02-24 03:55本頁(yè)面
【正文】 平行管D 陰性對(duì)照 O OC 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)(EU/mL) O O O OE2 O OA S80 O OB O O2023/1/2848結(jié)果判斷? 藥典要求– 陰性對(duì)照的反應(yīng)時(shí)間 (TD)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時(shí)間 (Tλ)– 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) |r|≥– 各批樣品的回收率 R滿足： 50% ≤R ≤200%? 廠家建議值– 變異系數(shù) CV%10%? 若供試品溶液 A所有平行管的內(nèi)毒素濃度平均值乘以稀釋倍數(shù)后，小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品符合規(guī)定，否則判供試品不符合規(guī)定 ? 無(wú)復(fù)測(cè)要求2023/1/2849終點(diǎn)比色法 BET? 原理– 當(dāng)鱟試驗(yàn)的顯色反應(yīng)到達(dá)預(yù)設(shè)的反應(yīng)終止時(shí)間（ T0)時(shí)，反應(yīng)混合液的吸光度值（ OD） 與內(nèi)毒素濃度（ C） 成正比，利用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素建立 ODC的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測(cè)定供試品的內(nèi)毒素含量。2023/1/2833試驗(yàn)步驟? 供試品限值的確定? 試劑的選擇? 供試品最大有效稀釋的計(jì)算? 反應(yīng)溶液的制備? 加樣及反應(yīng)? 結(jié)果判斷2023/1/2834干擾初篩試驗(yàn)舉例? 供試品限值– 硫酸慶大霉素， 100ml/瓶， 5000U/ml；– 藥典要求，硫酸慶大霉素限值 L=2023/1/2835試劑? 本試驗(yàn)使用鱟試劑的檢測(cè)范圍為 10~， 選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為 、 試劑名稱 廠家 裝量 規(guī)格動(dòng)態(tài)濁度法 TAL 安度斯 ~內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（ CSE）安度斯 10ng/支 10EU/ng（ CoA）BET水（ W） 安度斯 25ml/瓶 內(nèi)毒素 2023/1/2836最大有效稀釋倍數(shù)的計(jì)算? 光度測(cè)定法中，供試品最大有效稀釋倍數(shù)計(jì)算公式：MVD=cL/λ， 其中 λ為標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)濃度? 本試驗(yàn)，MVD=5000U/ml x =80（ 倍）2023/1/2837各反應(yīng)溶液的制備? 溶液 C的制備E100 WE10 WE2 WS原液 WS10 WS20 WS40 WS80備用液 W? 溶液 A的制備 W備用液2023/1/2838溶液 B的制備S10S20 S40S80 S20S40 2023/1/2839加樣及反應(yīng)? 取 TAL兩支，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)中的方法將其復(fù)溶；? 復(fù)溶鱟試劑后，運(yùn)行軟件，使其進(jìn)入待采集狀態(tài)；? 將兩支復(fù)溶好的鱟試劑溶液合并在一起，輕輕混勻避免產(chǎn)生氣泡；? 將鱟試劑液分裝至 20支反應(yīng)試管中， ；? 將相應(yīng)的溶液 A、 B、 C、 D加至反應(yīng)管中， ，每濃度平行 2管E2溶液 C溶液 D WS20S40S80S20E0. 25S40E0. 25S80E0. 25溶液 A溶液溶液 溶液 B溶液溶液2023/1/2840結(jié)果判斷? 藥典要求– 陰性對(duì)照的反應(yīng)時(shí)間（ TD ）大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時(shí)間（ Tλ）– 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) |r|≥– 回收率 R滿足： 50% ≤R ≤200%? 廠家建議值– 變異系數(shù) CV%10%2023/1/2841回收率的計(jì)算? 光度測(cè)定法試驗(yàn)中，在 供試品檢查濃度的溶液中 ,添加標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度 ,根據(jù)回收的內(nèi)毒素濃度與添加的內(nèi)毒素濃度的比值 (回收率 R)， 判斷供試品溶液對(duì)試驗(yàn)的干擾程度。2023/1/2829試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/2830試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/2831試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/28323 ）干擾初篩試驗(yàn)? 目的及原理– 只有在無(wú)干擾情況下，樣品的內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果才是有效的。當(dāng) r值為正時(shí)，表示該組數(shù)據(jù)呈正相關(guān)關(guān)系； r值為負(fù)時(shí)，該組數(shù)據(jù)為負(fù)相關(guān)關(guān)系。? 填寫相關(guān)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，使軟件進(jìn)入待采集狀態(tài)2023/1/2826加樣反應(yīng)– 先將復(fù)溶好的鱟試劑分裝至各反應(yīng)試管中， ；– 分別將反應(yīng)溶液加入各相應(yīng)反應(yīng)管中，一般按照從低濃度到高濃度的順序加樣，首先加陰性對(duì)照溶液；– 加樣完成后，將每支反應(yīng)管內(nèi)的混合液輕輕混勻后，插入動(dòng)態(tài)儀中反應(yīng)TALCSE NCBET水
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