光度測定法bet檢查技術(shù)-wenkub
2023-03-11 03:55:49 本頁面
【正文】 光度測定法方法學分類光度測定法 （定量法檢測）濁度法顯色法動態(tài)濁度法終點濁度法動態(tài)顯色法終點顯色法(比濁法 )(比色法 )2023/1/283光度測定法原理? 光電轉(zhuǎn)換原理– 光度測定法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素的混合物在反應過程的透光度變化與內(nèi)毒素濃度的關(guān)系來定量檢測內(nèi)毒素的一種方法。? 選擇不同的參數(shù) (Rt或 OD)將得到不同變化趨勢的動態(tài)曲線?；貧w分析Rt%預設(shè)透光度值 R0T1 T2 T392100T(分 )C1C2 C3LgT=bkLgCLgTT3T2T1C3 C2 C1 LgC（ 1）建立標準曲線2023/1/2810（ 2）測定樣品內(nèi)毒素濃度（ Cs）? 用鱟試劑與未知內(nèi)毒素含量的供試品 (S)反應，得到反應時間 Ts，比對 CT關(guān)系的標準曲線，可得出供試品的內(nèi)毒素含量 Cs。CxTo T(分 )Rx100Rt(%)Rt(%)Rt=bK2023/1/2817? ELx808IU型動態(tài)酶標儀– 制造商：美國伯騰公司（ BioTek）– 功能強大的細菌內(nèi)毒素檢測儀器– 豐富的面板操作及數(shù)據(jù)分析，無需電腦可獨立操作– 可使用多個波長同時分析2023/1/2818動態(tài)比濁法試驗程序? 器具的準備? 驗證試驗– 標準曲線的可靠性試驗– 干擾試驗? 檢查法2023/1/28191）試驗器具的準備器具分類 器具名稱反應試管 玻璃試管（外徑 875mm或 1075mm）稀釋容器 大口徑玻璃試管移液器具 刻度吸管及洗耳球，或移液器及無熱原吸頭等其他 試管架、酒精燈、異丙醇浸泡的無紡布、鑷子、剪刀、砂輪、封口膜或醫(yī)用膠布、標記紙等凡是與供試品或反應試劑接觸的器具，必須經(jīng)除熱原處理。當 r值為正時，表示該組數(shù)據(jù)呈正相關(guān)關(guān)系； r值為負時，該組數(shù)據(jù)為負相關(guān)關(guān)系。2023/1/2833試驗步驟? 供試品限值的確定? 試劑的選擇? 供試品最大有效稀釋的計算? 反應溶液的制備? 加樣及反應? 結(jié)果判斷2023/1/2834干擾初篩試驗舉例? 供試品限值– 硫酸慶大霉素， 100ml/瓶， 5000U/ml；– 藥典要求，硫酸慶大霉素限值 L=2023/1/2835試劑? 本試驗使用鱟試劑的檢測范圍為 10~， 選擇標準曲線濃度為 、 試劑名稱 廠家 裝量 規(guī)格動態(tài)濁度法 TAL 安度斯 ~內(nèi)毒素標準品（ CSE）安度斯 10ng/支 10EU/ng（ CoA）BET水（ W） 安度斯 25ml/瓶 內(nèi)毒素 2023/1/2836最大有效稀釋倍數(shù)的計算? 光度測定法中，供試品最大有效稀釋倍數(shù)計算公式：MVD=cL/λ， 其中 λ為標準曲線最低點濃度? 本試驗，MVD=5000U/ml x =80（ 倍）2023/1/2837各反應溶液的制備? 溶液 C的制備E100 WE10 WE2 WS原液 WS10 WS20 WS40 WS80備用液 W? 溶液 A的制備 W備用液2023/1/2838溶液 B的制備S10S20 S40S80 S20S40 2023/1/2839加樣及反應? 取 TAL兩支，參照標準曲線可靠性試驗中的方法將其復溶；? 復溶鱟試劑后，運行軟件，使其進入待采集狀態(tài)；? 將兩支復溶好的鱟試劑溶液合并在一起，輕輕混勻避免產(chǎn)生氣泡；? 將鱟試劑液分裝至 20支反應試管中， ；? 將相應的溶液 A、 B、 C、 D加至反應管中， ，每濃度平行 2管E2溶液 C溶液 D WS20S40S80S20E0. 25S40E0. 25S80E0. 25溶液 A溶液溶液 溶液 B溶液溶液2023/1/2840結(jié)果判斷? 藥典要求– 陰性對照的反應時間（ TD ）大于標準曲線最低濃度的反應時間（ Tλ）– 標準曲線的相關(guān)系數(shù) |r|≥– 回收率 R滿足： 50% ≤R ≤200%? 廠家建議值– 變異系數(shù) CV%10%2023/1/2841回收率的計算? 光度測定法試驗中，在 供試品檢查濃度的溶液中 ,添加標準
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1