【正文】 部分，質(zhì)量控制實驗室必須評詁培養(yǎng)基在什么情況下可以有效的獲得低級別的環(huán)境微生物。因為可以監(jiān)測到那些降落在培養(yǎng)皿上的微生物，所以沉降菌檢測方法可以被作為定性或是半定量的空氣監(jiān)控方法。制造商必須這些設(shè)備被校驗且正確使用。制造商必須知道這些設(shè)施進(jìn)行空氣監(jiān)控的能力，取樣器必須在收集效率、潔凈度、消毒難易及對單向空氣的影響大小的基礎(chǔ)上進(jìn)行選擇。每種設(shè)備都是測定一定體積內(nèi)的有機體數(shù)量，但是又都有優(yōu)點和缺點。可以使用接受皿和擦拭法來進(jìn)行這類試驗。一旦 發(fā)現(xiàn)微生物相關(guān)的不良趨勢，必須調(diào)查確認(rèn)潔凈室內(nèi)分離到的微生物對潔凈室內(nèi)使用的消毒劑的敏感性。 ?消毒操作程序必須詳細(xì)描述（如 配制方法、使用頻率和接觸時間 ）以確保能夠重復(fù)。許多 常見的消毒劑對孢子無效 （如70%的異丙醇對芽孢桿菌 Bacillus upp的芽孢無效）。 ?為了避免引入新的污染消毒劑 必須無菌 ，且存放在適當(dāng)?shù)模?無菌）容器 中并在書面程序預(yù)先規(guī)定的 最長時間 內(nèi)使用。 ?消毒劑 /消毒方法的 適應(yīng)性、有效性和局限性 都必須評詁。微生物 種類的明顯變化 必須考慮進(jìn)行環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)的 重新審核 。 ? 趨勢分析報告必須包括 每個地點、每個班次、每個房間、每個操作人員和其他參數(shù)產(chǎn)生 的數(shù)據(jù)。必須建立書面的程序，詳細(xì)描述審核的頻率和采取的行動。使用檢測結(jié)果的 平均值會掩蓋 不可以接受的位置的情況。 ? 環(huán)境監(jiān)控的數(shù)據(jù)必須為制造環(huán)境的質(zhì)量提供信息?？梢?參考 歷史數(shù)據(jù)庫、培養(yǎng)基灌裝試驗、潔凈區(qū)確認(rèn)和清潔衛(wèi)生處理研究的數(shù)據(jù)來建立這個標(biāo)準(zhǔn)。 ? 所有環(huán)境監(jiān)控點的位置都必須在 SOPs中詳細(xì)描述，以確?？梢栽谙嗤牡攸c重復(fù)操作。在缺少任何不利趨勢的信息前提下，單一超出 行動限 的情況都必須 進(jìn)行調(diào)查和評詁 ，并決定是否需要采取任何合適的 補救措施 。由于 假陰性可能發(fā)生，連續(xù)的微生物生長檢測結(jié)果只是一種不利趨勢。關(guān)鍵區(qū)域檢出微生物污染的結(jié)果 不一定 要 成批拒收 ，必須 立即 對操作運行信息和數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)查，必須注意有可能存在的極低概率的 假陽性 情況發(fā)生。當(dāng)設(shè)定關(guān)鍵取樣點時，必須考慮這些點在工藝中的 污染風(fēng)險 ，包括 裝備困難、工藝操作持續(xù)時間、中斷影響 等因素?？梢栽谥匾牟僮骰顒踊蚴巧a(chǎn)中產(chǎn)品暴露位置進(jìn)行 空氣和表面取樣 。 ? 書面程序中說明微生物 最大風(fēng)險的位置 非常重要。取樣點位置必須以書面程序說明，取樣時間、頻率和位置 都必須在無菌工藝設(shè)施的監(jiān)控環(huán)境內(nèi)用科學(xué)合理的方法進(jìn)行。 ?潔凈室內(nèi) 空氣和表面質(zhì)量 的 評詁必須從書面定義好的規(guī)程和科學(xué)的測試方法開始。此程序不但為無菌工藝環(huán)境質(zhì)量提供了有意義的信息，還為相鄰的潔凈區(qū)域提供了環(huán)境變化的趨勢數(shù)據(jù)。滅菌器性能特性的日常評詁（如平衡時間對于確保滅菌單元始終按照驗證條件進(jìn)行連續(xù)的運行）是非常重要的。哪些滅菌器或 SIP操作中需要人工手動控制的閥門操作，都必須在制造規(guī)程和批記錄中記錄下來。 ?為了確保滅菌設(shè)備的人工控制，必須適當(dāng)?shù)脑O(shè)計設(shè)備，注意諸如 滅菌介質(zhì)可達(dá)性能、管道坡度、冷凝水完全排除 等性能。D值測定可以使用獨立的實驗定完成。驗證中使用的傳感器必須在驗證的前后 都校驗； ? 用于監(jiān)控滅菌器滅菌時間的儀器必須周期性校驗； ? 生物指示劑使用的微生物計數(shù)器必須確認(rèn)，且生物指示劑必須保存在合適的條件下； ? 如果供應(yīng)商的 COA的可靠性已經(jīng)通過合適的確認(rèn)程序確認(rèn)，則生物指示劑（如胞子試紙，玻璃安瓿）的 D值 可以在每批確認(rèn)后接受。測定滅菌周期參數(shù)的設(shè)備都必須進(jìn)行日常校驗。變更控制程序必須足夠說明負(fù)載情況的變化或是滅菌器的結(jié)構(gòu)改變。必須證明滅菌方法可以達(dá)到使 微生物下降至 106或是更好的情況 。當(dāng)確定什么物質(zhì)特別難滅菌時必須注意過濾器 /泵和灌裝系統(tǒng)的滅菌。 ? 熱穿透試驗必須使用已經(jīng)建立的 負(fù)載模式 進(jìn)行 評詁 ，以確定不能有效達(dá)到滅菌致死率的熱物質(zhì)穿透難度。生產(chǎn)批記錄的規(guī)定必須和驗證的裝載方法一致。 ? 驗證研究必須可以證明 滅菌周期的有效性 ，且必須進(jìn)行周期性再確認(rèn)。 ? 無菌工藝設(shè)備的無菌處理必須 每批 進(jìn)行?？拷鼰o菌產(chǎn)品的表面，只要有理由懷疑其有潛在污染的可能，都必須保持無菌狀態(tài)。生產(chǎn)中過濾器完整性測試的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)必須同細(xì)菌截留驗證研究產(chǎn)生的數(shù)據(jù)相一致。無菌過濾器必須在 每批 生產(chǎn)后更換，對那此可以重復(fù)使用的情況必須進(jìn)行合理解釋，其無菌過濾驗證必須包括最大的 可處理的批數(shù)。但是濾器使用者必須審核過濾驗證報告來確保其達(dá)到工藝的用途，其數(shù)據(jù)必須與使用者的產(chǎn)品和生產(chǎn)條件相一致（因為濾器的性能在不同條件下對不同的產(chǎn)品有很大差異）。 ? 可以影響過濾器性能的因素包括： ? 被過濾物質(zhì)的黏度和表面張力； ? PH值 ； ? 被過濾物質(zhì)或配方組分和過濾器的相容性； ? 過濾壓力； ? 過濾速度； ? 最大使用時間； ? 過濾溫度； ? 滲透性（重量滲透濃度表示）； ? 液壓減震效果。只要有充分的理由，過濾器對藥物制劑配方的有效性可以使用合適的替代方法來評詁，但替代產(chǎn)品不能含有抗菌成分，且模擬的工藝和生產(chǎn)條件必須相同。 因為過濾器膜上通常有些孔徑比一般孔徑要大，有可以使微生物通過的風(fēng)險，此風(fēng)險隨微生物數(shù)量的增加而增大，因此挑戰(zhàn)試驗的微生物數(shù)量非常重要。滅菌前產(chǎn)品的生物載量必須檢測以確定潛在污染微生物的趨勢特征。無菌過濾驗證中必須包括模擬最差生產(chǎn)條件下的 微生物挑戰(zhàn)試驗 和 過濾器完整性測試 。無菌級過濾器必須驗證可以從工藝流中重復(fù)去除活的微生物來獲得無菌液體。對于這樣的情況必須有支持的文件和合理的解釋。（美國食品藥品化妝品法案 section301a,：禁止制造商出售任何非無菌制劑產(chǎn)品）。對于一條生產(chǎn)線上重復(fù)發(fā)生試驗污染事故，無論是否符合接受標(biāo)準(zhǔn)，都是一個信號表明無菌工藝生產(chǎn)線的不好趨勢，必須確認(rèn)問題、改正和再驗證。在合理設(shè)計的設(shè)施內(nèi)的當(dāng)代無菌工藝操作被證明可以達(dá)到 零污染率， 且一般不會導(dǎo)致培養(yǎng)基灌裝試驗被污染。灌裝試驗的總數(shù)和被污染的數(shù)目沒有直接比例關(guān)系。相關(guān)的染菌必須鑒定出其 種系 ，必須調(diào)查污染的可能原因。 ： ? 工藝模擬的運行必須在 QC部門 的監(jiān)控下進(jìn)行，污染單元的數(shù)量必須和灌裝試驗?zāi)M的時間和活動相一致。 ? 大數(shù)量的在線清除不應(yīng)該影響培養(yǎng)基灌裝試驗?zāi)M正常生產(chǎn)來檢測潛在的污染能力。千萬不要在灌裝試驗中移出比實際生產(chǎn)中更多的單元。如果發(fā)現(xiàn)在很難檢測損壞與微生物污染之間有必然的聯(lián)系，必須進(jìn)行完整的調(diào)查來查明原因。為方便目測觀察微生物生長情況，F(xiàn)DA建議采用的容器為透明色。如果 QC不負(fù)責(zé)具體檢查，也必須在這樣的檢查時現(xiàn)場監(jiān)督。 ? 培養(yǎng)基單元必須在足以檢測到最難生長的微生物條件下培養(yǎng)，根據(jù)以下思想選定培養(yǎng)條件： －－培養(yǎng)溫度必須符合生物載量和環(huán)境中菌種的生長，一般不超過 20~35℃ （通常菌種都有規(guī)定的培養(yǎng)溫度范圍），培養(yǎng)時必須維持在目標(biāo)溫度的 177。 ? 每個單元都必須灌入合適數(shù)量 和類別的培養(yǎng)基，并確保其接觸到容器的內(nèi)部（倒置 或旋轉(zhuǎn)），以便目測觀察微生物的生長。環(huán)境監(jiān)控和無菌測試的菌種必須用于促生長的挑戰(zhàn)性試驗，菌種的接種單位必須 100CFU。選擇的培養(yǎng)基必須證明能夠促進(jìn) G＋、 G－、酵母菌和霉菌（以及 USP生物指示劑）的生長。在 SOP允許的 “壓力條件”（如最大工人數(shù)和提高的運行水平） 內(nèi)，灌裝試驗涵蓋這些挑戰(zhàn)是非常重要的，也支持了這些研究的有效性，此所謂的“壓力條件”不包括人為制造的極端環(huán)境條件（如將HVAC系統(tǒng)調(diào)整為最差條件）。 ：培養(yǎng)基灌裝試驗必須在足以代表實際的生產(chǎn)環(huán)境下進(jìn)行。 ?對于凍干操作， FDA建議使用不封閉的容器暴露在部分抽空的設(shè)備內(nèi)來模擬正常工藝，不需冷凍產(chǎn)品，必須小心操作確保培養(yǎng)基處于有氧狀態(tài)，以避免抑制潛在的微生物生長。一般性發(fā)生的中斷操作必須在日常模擬中涵蓋，那些不經(jīng)常發(fā)生的中斷操作可在周期性的模擬中確認(rèn)。 ?以 最大批量和運行時間 基礎(chǔ)上灌裝試驗是 最真實的模型 ，若采用任何其他的合適模型都必須進(jìn)行合理的解釋。一旦制定的整改措施，就必須進(jìn)行模擬試驗以確認(rèn)缺陷已經(jīng)被 修復(fù)，工藝已回到了受控狀態(tài)。任何可能影響無菌工藝性能的變更或事件都必須增加額外的培養(yǎng)基灌裝試驗來評詁。 ?研究設(shè)計應(yīng)考慮的要素： ? 生產(chǎn)線允許的最長時間范圍，可造成潛在污染的相關(guān)因素（如員工的疲勞）； ? 人員數(shù)量及操作活動； ? 每次運行中的常規(guī)中斷操作次數(shù)、類別和復(fù)雜程度以及非常規(guī)的中斷操作和干擾事件（如維護(hù)、停產(chǎn)、設(shè)備調(diào)整）； ? 設(shè)備的無菌裝配； ? 無菌分裝和凍干過程； ? 有代表性的無菌加料（如容器 /密封件和無菌組分的添加）和轉(zhuǎn)移操作的次數(shù)； ? 班次變化、中途休息和合適的更衣次數(shù)； ? 無菌設(shè)備連接 /斷開的類別； ? 無菌取樣操作； ? 生產(chǎn)線速度和構(gòu)造； ? 稱重；容器密封系統(tǒng)（如大小、類別、設(shè)備兼容性）； ? 書面規(guī)程中的無菌工藝相關(guān)的特殊限定（ 如 CIP指令 前的環(huán)境要求） ： ?在最初的確認(rèn)時，至少應(yīng)進(jìn)行 三次 連續(xù)且獨立的 模擬。 ?必須有完整的批記錄，環(huán)境監(jiān)控記錄等支持這樣的模擬研究，必須書面定義條件的選擇原因。 七、對無菌工藝和滅菌方法驗證 研究 ?為確保產(chǎn)品無菌，應(yīng)對其無菌灌裝和封口操作及滅菌方法進(jìn)行驗證，必須進(jìn)行“ 培養(yǎng)基灌裝試驗 ”－－用培養(yǎng)基替代產(chǎn)品模擬整個工藝過程（包括生產(chǎn)環(huán)境），確認(rèn)培養(yǎng)基是否在工藝過程中被污染 。這個時間限制也可以防止上游的生物載量和內(nèi)毒素載量的增加。生物載量和內(nèi)毒素載量必須在建立配方加工階段的時間限制的時候進(jìn)行評詁。 六、生產(chǎn)時間限制 根據(jù) ： ?無菌工藝的每步操作都最好設(shè)定時間限制； ?時間限制必須包括：大批量產(chǎn)品的配制和滅菌時間間隔、過濾工藝時間間隔、產(chǎn)品暴露在生產(chǎn)線上的時間間隔、無菌設(shè)備 /容器 /密封件的保存時間限制等。一些 CIP規(guī)程可以先使用合適的高純水或洗滌劑（如稀酸稀堿、表面活性劑）初洗，最后用熱的注射用水沖洗。 ? 無菌級別的過濾器和濕熱滅菌不能夠有效的去除內(nèi)毒素。設(shè)備必須設(shè)計成容易拆御 /裝配 /清洗 /消毒或滅菌。藥物成分、容器 /密封件、儲存時間限制和制造設(shè)備都在內(nèi)毒素的控制范圍內(nèi)。 ? 任何與中控或最后檢查不一致的或超出范圍的結(jié)果都必須 按照 。 ? 設(shè)備適用性問題或購入的容器 /密封件質(zhì)量缺陷都會造成容器密封系統(tǒng)的不完整，如果危害是由于沒有及時檢出而造成的完整性破壞，必須立即改善這些系統(tǒng)。對最后分裝好的產(chǎn)品的檢查中發(fā)現(xiàn) 任何被破壞 或 有缺陷 的 單個容器 必須檢出并被銷毀。 對已建立供應(yīng)商質(zhì)量審計體系（ 定期測試 ）的合同制造商可以在外觀測試和對方 COA（檢驗 證書）的基礎(chǔ)上接受容器 /密封件。 ? 必須特別注意硅化處理過程是膠塞的潛在污染源，其所用的硅油（聚硅氧烷） 必須符合一定質(zhì)量規(guī)格，必須對 制劑產(chǎn)品的安全性 /質(zhì)量 /純度 不產(chǎn)生副作用。 ? 為防止微生物滋生的污染，橡膠密封件滅菌后必須 徹底干燥 ，其含水量應(yīng)符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。 ? 橡膠密封件（膠塞和注射器活塞）在進(jìn)行純蒸汽滅菌前的最初清洗水至少使用符合 USP最低內(nèi)毒素的純化水， 最后 沖洗水必須是注射用水。容器的放置必須與實際生產(chǎn)相一致。驗證研究數(shù)據(jù)必須證明采用的方法可以將內(nèi)毒素降低至 %（ 3Logs）。 ?無菌制劑產(chǎn)品的容器具 /密封件清洗的最后一道清洗劑必須是符合 USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注射用水。 /密封件 ?制備非腸道產(chǎn)品所使用的容器具 /密封件必須無菌、無熱源，其滅菌方法必須符合它們的材質(zhì)性質(zhì)，其滅菌的有效性必須驗證證明。過濾的藥液再進(jìn)行灌封或無菌結(jié)晶或凍干成粉末。 ? 無菌制劑的組分通常單個滅菌或是多個組分混合后的混合物滅菌。如果使用了一個或多個含有微生物或細(xì)菌內(nèi)毒素的組分，則產(chǎn)品會被污染，因此對這些組分中的微生物載量和內(nèi)毒素指標(biāo)的確認(rèn)及建立合適的可接受限度非常重要。后續(xù)采取的措施應(yīng)包括增加取樣、增加觀測、重新培訓(xùn)、再確認(rèn)著裝程序、特殊情況下的人員重新調(diào)整、安排指定的人員離開無菌操作區(qū)域。 ?對無菌操作人員的監(jiān)控目標(biāo)是 始終維持 在操作過程中保持手套和衣物的無污染狀態(tài)，單單取操作前的滅菌手套是不夠的，因為在后續(xù)的操作中微生物會重新繁殖。監(jiān)控樣品還應(yīng)包括衣物上合理部分的合適取樣頻率下獲得的樣品。 ?操作人員是嚴(yán)重影響無菌產(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，必須建立高度預(yù)警且靈敏的