基因工程-2-載體-文庫吧資料
2025-02-12 10:40本頁面
【正文】 ? 1以我獨沈久，愧君相見頻。 * + + 構建基因組文庫 + + 構建 DNA文庫 + 常規(guī)的亞克隆化 + 構建新型的 DNA結構 + 序列分析 + + 單鏈探針 + 外源基因在大腸桿菌中的表達 + * 外源 DNA如超過 10kb，則重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和 DNA得率都非常低 四種常用載體的比較 ? 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 五、噬菌體展示載體 其基本原理是將外源 DNA片段插入噬菌體編碼蛋白基因PⅢ 中，使外源 DNA片段對應的表達產(chǎn)物融合在噬菌體的外殼蛋白中形成融合蛋白，呈現(xiàn)在噬菌體表面。 ① 能象 λDNA 一樣體外包裝，并高效導入受體細胞 ② 可以裝載比質(zhì)粒或 λDNA 大得多的外源 DNA片段 cos區(qū) kb+質(zhì)粒部分 外源 DNA ③ 由于攜帶質(zhì)粒的選擇標記，便于篩選 ④ 由于質(zhì)粒上的多種單一酶切位點，便于克隆。 λ噬菌體的改造： ⑴ 切去非必須區(qū)段 ， 在切去的同時 ， 加載目的基因 （ 1523Kb） ； ⑵ 去除過多的酶切位點 ， 每種酶只留 12個切口； ⑶ 增加選擇標記基因（ selectable marker）； ⑷ 建立 λ DNA的體外包裝。 ⑵ 野生型只能接納一定長度的 DNA。 Type Name Description bacterial origin ColE1 ColE1 (pUCtype) origin of replication promoter Gal110 promoter Gal110 yeast promoter selectable marker ampR ampicillin resistance gene selectable marker chlR chloramphenicol resistance gene LOST in rebined (with insert) form selectable marker URA3 URA3 auxotrophy selectable marker (yeast) yeast centromere CEN4 yeast cent
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