基因工程-克隆載體09-文庫吧資料
2025-02-12 10:54本頁面
【正文】 hromosome ,TAC) ,這些載體不僅具有較大的克隆容量 ,而且具備了直接 轉(zhuǎn)化植物 進行功能互補實驗的功能。2) BAC 載體以環(huán)型超螺旋狀態(tài)存在 ,從大腸桿菌中提取較方便3) BAC 的復制子來源于 F 因子 ,可 穩(wěn)定遺傳 ,嵌合及重組現(xiàn)象少4) 克隆位點的兩側(cè)具有 T7 和 Sp6 聚合酶啟動子 ,可以用于轉(zhuǎn)錄獲得 RNA 探針或直接用于插入片段的末端測序優(yōu)點源于 P1 的人工染色體 (PAC) PAC 載體以 F 因子和噬菌體 P1 為基礎構(gòu)建 ,兼有二者的特點 ,通過電轉(zhuǎn)化可將 PAC 導入大腸桿菌。4) 轉(zhuǎn)化效率低 。2) 穩(wěn)定性差 ,插入片段存在重排和丟失現(xiàn)象。端粒 (telomere) ,對染色體 DNA 兩個末端起封口和保護作用 YAC 能容載長達 900～ 1000kb片段。應查有關資料 M13最常用的宿主菌為 JM系列（ JM101～110）酵母人工染色體 ( YAC) 真正的人工染色體要在寄主細胞中穩(wěn)定地復制并遺傳下去 ,必須具備三個元件 : 復制起始區(qū) (origin of replication) ,參與染色體 DNA 復制起始結(jié)構(gòu)的形成 。若無 輔助 病毒存在，則以質(zhì)粒的形式復制，產(chǎn)生雙鏈 DNA）等pEMBL(f1與 pUC8組成 ) pBluescript(f1與 pBR322組成 )。 單鏈可用作測序、制備探針、定點誘變 。 單鏈噬菌體包括 M1 f fd，均為絲狀，親緣關系密切，長度均為 ，單鏈環(huán)狀正股DNA分子 優(yōu)點： 胞內(nèi)為雙鏈，胞外為單鏈。當 λ 侵入宿主細胞后，線狀 DNA分子借助粘性末端連結(jié)成 環(huán)狀 分子 野生型 λ 噬菌體基因組 DNA 的 MW為 48Kb,所以包裝上限： 105% 48Kb=51Kb 必須區(qū)段 28 Kb，所以克隆能力為 5128=23 Kb λ 噬菌體作為載體的優(yōu)點：a. 可容納較大的外源 DNA片段 感染效率 λ 能裂解宿主細胞，容易提取 λ 載體DNA或重組 λDNA λ 載體組建的 DNA或 cDNA文庫易于長期保存 柯斯質(zhì)粒載體 粘粒載體，由 Collins和 Hohn于 1978年構(gòu)建 Cosmid:cos sitecarry plasmid,帶有粘性末端位點的質(zhì)粒 。雙鏈 DNA噬菌體載體 噬菌體載體 質(zhì)粒載體的受體細胞 pUC18/19 pGEM系列：多功能質(zhì)粒載體是由 pUC質(zhì)粒改建而來?？寺≥d體主要用于擴增或保存 DNA 片段pBR322系列 2. 插入失活3. GFP質(zhì)粒的基本條件若干限制酶 單一 識別位點小的分子量、高的拷貝數(shù)常用質(zhì)粒載體克隆載體 氨芐青霉素抗性基因（ Ampicillin resistance gene, Ampr） 四環(huán)素抗性基因（ Tetracycline resistance gene,Tetr） 氯霉素抗性基因（ chloramphenicol resistance gene, Cmr, cat） 卡那霉素和新霉素抗性基因（kanamycin/neomycin resistance gene, kanr, neor） 蔗糖致死基因 SacB ：含蔗糖的培養(yǎng)基上 sacB 基因的表達對大腸桿菌來說是致死的，因此該基因可用于插入失活篩選重組子篩選標記 無此基因而無此功能者叫 非接合型或非自我轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒 （ noconjugative plasmid） 非自我轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒： R質(zhì)粒、 Col質(zhì)粒 自我轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒： F質(zhì)粒及 Ent質(zhì)粒（ 可產(chǎn)生腸毒素 ） 基因工程中由于使用非接合型質(zhì)粒，因此質(zhì)粒的 轉(zhuǎn)移需人工條件 ，一般是用化學（氯化鈣）、物理（電擊）或其它方法（脂質(zhì)體）改變細胞膜通透性，使質(zhì)粒 DNA進入細胞，該過程叫 轉(zhuǎn)化 質(zhì)粒在自然條件下可從宿主菌中消失，或在人工條件下消失，這叫 質(zhì)粒的消除，俗稱丟失 。兩個質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性。通常一個質(zhì)粒含有一個與相應的順式作用控制要素結(jié)合在一起的 復制起始區(qū) （整個遺傳單位定義為復制子） 復制子
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