【正文】 ancer）基因 也是 FAP的易感基因，定位于第 5號(hào)染色體長臂（ 5q21），由 17個(gè)外顯子 16個(gè)內(nèi)含子組成，其 mRNA全長為 4181bp，編碼 829個(gè)氨基酸殘基的蛋白，分子量為 93 kD。 近年來對(duì) FAP與抑癌基因之間的關(guān)系研究得較多 : APC (adenomatous polyposis coli)基因 MCC（ mutated colorectal cancer）基因 DCC（ deleted in colorectal carcinoma）基因 ? APC (adenomatous polyposis coli)基因 是 FAP的易感基因，定位于第 5號(hào)染色體長臂（ 5q21），由 15個(gè)外顯子及 14個(gè)內(nèi)含于組成，其 mRNA全長為 8535bp，編碼 2842個(gè)氨基酸殘基的蛋白，分子量為 500kD，與酵母菌中調(diào)節(jié) ras族癌基因的基因中一個(gè)小片段有同源性。 以上現(xiàn)象說明， p73抑癌和失活的分子機(jī)理尚有待于進(jìn)一步研究闡明。 隨著對(duì) p73作用分子機(jī)理研究的深入，發(fā)現(xiàn)了一些矛盾的現(xiàn)象： ①在各種腫瘤中均檢測(cè)不到 p73的突變，甚至在一些癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了 p73的高表達(dá)； ② p73/小鼠中見不到腫瘤易患現(xiàn)象，但卻有嚴(yán)重的發(fā)育異常，尤其是腦和免疫系統(tǒng)。 因此，雖然 p53和 p73均能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但二者導(dǎo)致調(diào)亡的信號(hào)途徑可能有所不同。 例如 p73α 和 p73β 對(duì) p21的誘導(dǎo)水平分別比 p53低了 6倍和 3倍。 p73基因在染色體上定位的特殊性以及其蛋白產(chǎn)物與 p53蛋白在結(jié)構(gòu)上的相似性，均提示它可能是一個(gè)抑癌基因，并且可能與 p53蛋白在功能上有相似性： 實(shí)驗(yàn)證明， p73過表達(dá)時(shí)能抑制細(xì)胞生長和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而其突變體則無此功能。 P73 α 和 p73 β 蛋白與 p53之間有較弱的異型間相互作用。 雖然哺乳動(dòng)物的 p53蛋白與 p73蛋白的羧基端沒有明顯的同源性，但是人 p73 α 蛋白的羧基端與最近在無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的 p53蛋白同源，說明 p53基因可能是從更為原始的“ p73樣”基因進(jìn)化而來的。 迄今共發(fā)現(xiàn) 6種 p73基因的轉(zhuǎn)錄剪切變異體，它們分別為 : p73 α p73 β p73 γ p73 δ p73 ε p73 φ p73 α 由 636個(gè)氨基酸殘基組成，是全長的 p73蛋白， p73 β 則由 499個(gè)氨基酸殘基組成，這是由于 p73基因轉(zhuǎn)錄時(shí)將外顯子 13剪切而缺失了 96個(gè)氨基酸殘基，并導(dǎo)致開放讀框的改變。此區(qū)域由于在神經(jīng)母細(xì)胞瘤及其它多種腫瘤細(xì)胞中常發(fā)生缺失因而被認(rèn)為可能存在著某種抑癌基因。根據(jù)此序列編碼的蛋白的分子量，將其命名為 p73基因。 3. p73基因 p73基因的發(fā)現(xiàn)極為偶然。 WAF1的蛋白產(chǎn)物 p21是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子，可有效抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的活性，從而阻斷細(xì)胞周期的演進(jìn)。 ② wtp53信號(hào)區(qū)的功能 此區(qū) 34個(gè)氨基酸中有 12個(gè)脯氨酸，含 5個(gè)脯 XX脯 重復(fù)序列，產(chǎn)生一個(gè) SH3區(qū)結(jié)合部位。 wtp53的轉(zhuǎn)錄活性受腺病毒 EIB蛋白及癌基因產(chǎn)物 MDM2蛋白的抑制。 TF11D是 TATA結(jié)合蛋白（ TATA binding ）和 TBP相關(guān)因子（ TBP associated factor,TAF）結(jié)合而成的復(fù)合物。這一特殊的遺傳學(xué)現(xiàn)象稱之為 顯性負(fù)效應(yīng)（ dominant negative effect）。所以當(dāng)一個(gè) p53等位基因發(fā)生突變時(shí)，就足以使細(xì)胞呈現(xiàn)惡性表型。而只能檢測(cè)到 mp53的 mRNA和蛋白。用這一技術(shù)不僅可以測(cè)定等位基因缺失或突變的性質(zhì)，還可對(duì)其進(jìn)行精確的 定位 。如果有一個(gè)等位基因缺失，就會(huì)顯示單一的帶型，這種現(xiàn)象稱為 雜合性丟失（ loss of heterozygosity, LOH） ； ② 單鏈 DNA構(gòu)型多態(tài)性（ single Strand conformation polymorphism,SSCP）分析 ： 正常細(xì)胞在變性后，經(jīng)聚丙烯酸胺凝膠電泳，呈現(xiàn)一定的帶型。 檢查等位基因的缺失或突變可采用以下幾種方法： ①限制性 DNA片段長度多態(tài)性分析 ②單鏈 DNA構(gòu)型多態(tài)性分析 ③直接 DNA測(cè)序 ① 限制性 DNA片段長度多態(tài)性（ restriction DNA fragment length polymorphism,RFLP）分析： 提取 DNA，用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶解，再用電泳分離。 蛋白有 5個(gè)高度保守區(qū)，分別位于第 13～1 117～ 14 171～ 19 236～ 258及 270～282密碼子區(qū)域。 進(jìn)一步的研究表明，能夠使鼠類細(xì)胞發(fā)惡性轉(zhuǎn)化的基因?qū)嵸|(zhì)上是突變型 p53基因，而野生型 p53基因不僅不誘發(fā)轉(zhuǎn)化，相反地能抑制轉(zhuǎn)化。 由于己知 p53基因定位于 ，所以有 可能成為等位基因丟失的靶基因．因此對(duì)腫瘤細(xì)胞中殘留的等位基因進(jìn)行了序列分析，發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)殘留的 p53等位基因己經(jīng)經(jīng)歷了點(diǎn)突變。 在對(duì)大腸癌、肺癌、乳腺癌等實(shí)體瘤進(jìn)行大量細(xì)胞遺傳學(xué)研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，第 17號(hào)染色體短臂經(jīng)常丟失。這些資料提示，p53的作用類似于 myc或 ras，因此可能是一個(gè)癌基因。 2． P53基因 在過去十幾年里，人們對(duì) p53基因的認(rèn)識(shí)經(jīng)歷了一個(gè)漫長的歷程 : 最初是通過在鼠類細(xì)胞中 p53蛋白與 DNA腫瘤病毒抗原的結(jié)合而發(fā)現(xiàn)的。例如，用 Rb基因轉(zhuǎn)染 NIH/3T3細(xì)胞可抑制 cfos癌基因在 G1晚期的表達(dá)。 轉(zhuǎn)錄因子 E2F也能與 Rb蛋白形成復(fù)合物，故 Rb蛋白可通過同樣的機(jī)理來調(diào)節(jié) E2F因子的轉(zhuǎn)錄活性。例如，細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶能同 Rb基因的 LT/EIA結(jié)合，這種結(jié)合同Rb蛋白的生長抑制功能有關(guān)。 Rb基因可與某些 腫瘤病毒 的轉(zhuǎn)化蛋白形成穩(wěn)定的復(fù)合物，其中包括 SV40抗原，腺病毒EIA蛋白和人乳頭瘤病毒 E6/E7蛋白，故可能對(duì)腫瘤病毒的轉(zhuǎn)化起抑制作用。 常見的三種蛋白產(chǎn)物的分子量分別為 110kD 未磷酸化形式 112kD 磷酸化形式 114kD 其磷酸化程度在細(xì)胞周期中發(fā)生周期性變化： G0 期、 G1期 蛋白未磷酸化 S期、 G2期 大多數(shù)蛋白已磷酸化 Rb蛋白磷酸化程度與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cde2／ cde28的活性呈正相關(guān)。 檢查了 6例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤病人，發(fā)現(xiàn)其中 2例基因完全不表達(dá)，其他 4例則表達(dá)下降，而且表達(dá)的 mRNA分子長度減少至 ，對(duì)進(jìn)行序列分析的結(jié)果表明，它編碼一個(gè)含816氨基酸殘基的蛋白，經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索未發(fā)現(xiàn)與該基因同源的序列。 Lee等于 1987年首次成功地分離到了 Rb基因的 cDNA分子克?。? 以脂酶 D的基因組 DNA分子克隆為起點(diǎn)，將其兩側(cè)遠(yuǎn)端的 DNA片段作為探針，用染色體步移（ Chromosome walking）的方法．從人胚視網(wǎng)膜和胎盤的 cDNA文庫中篩選 Rb的相關(guān)基因。體細(xì)胞中的正常等位基因如發(fā)生突變而失活，則可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，其基因型變成 13q ／ l3rb。 這一現(xiàn)象提示，脂酶 D基因與 Rb基因緊密連鎖， Rb基因的缺失導(dǎo)致脂酶 D活性的相應(yīng)下降。 等位基因的缺失或失活可由以下情況引起： 染色體丟失（ 13 ） 染色體部分缺失（ 13q ） 等位基因突變（ 13qRB→ I3qrb） 因此，腫瘤細(xì)胞的基因型有以下幾種可能性： 13qrb／ 13qrb 13qrb／ 13q 13qrb／ 13 13q ／ 13q 13 ／ 13 有關(guān)脂酶 D（ esterase D， ED）的研究究揭示了一個(gè)饒有興趣的現(xiàn)象。大量研究資料證明，位于人類細(xì)胞第 13號(hào)染色體長臂 13ql4區(qū)域的 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤易感基因（ retinoblastoma susceptibility gene， Rb） 的缺失或失活，是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的主要原因。 近年來又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些新的抑癌基因。 但最終確定其存在，必須分離到抑癌基因，并對(duì)其結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行詳細(xì)的分析。 細(xì)胞遺傳學(xué)的發(fā)展在這方面提供了進(jìn)一步的證據(jù)。 第二節(jié) 抑癌基因 抑癌基因 (antioncogene)過去常稱之為腫瘤抑制基因（ tumor suppressor gene）。 6. 基因甲基化的改變 在腫瘤細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)癌基因和抑癌基因的甲基化改變，表現(xiàn)為癌基因的低甲基化或去甲基化，或抑癌基因的異常甲基化。這一情況類似于上述ALV前病毒的插入，即 cmyc插入到啟動(dòng)子的下游，但處于相反的轉(zhuǎn)錄方向。由于這些部位經(jīng)常進(jìn)行著活躍的轉(zhuǎn)錄，可以提供強(qiáng)有力的啟動(dòng)子，而易位的第 8號(hào)染色體片段已證明含有細(xì)胞癌基因 cmyc,可以被相鄰的啟動(dòng)子活化。 (translocation) 在人類巴基特淋巴瘤的細(xì)胞系中，發(fā)現(xiàn)第 8號(hào)染色體長臂遠(yuǎn)端片段易位至第 2， 22和 14號(hào)染色體的一定部位。 同時(shí) CooPer等發(fā)現(xiàn)，從這類腫瘤中提取的DNA可轉(zhuǎn)化 NIH／ 3T3細(xì)胞，但奇怪的是，從中分離到的轉(zhuǎn)化基因既不是 ALV的 DNA，也不是活化的 cmyc，而是位于另一位點(diǎn)的片段，稱之為 Blym，它編碼一個(gè)分子量約為 7kD的多肽。 在有些情況下，前病毒雖插入到 cmyc的 5`端，但處于相反的轉(zhuǎn)錄方向，或插入到的 3`端而處于相同的轉(zhuǎn)錄方向。 Hayward等進(jìn)一步證明，在大多數(shù)腫瘤中 ALV前病毒插入到細(xì)胞癌基因的 5`端，并處于相同的轉(zhuǎn)錄方向。 但是，在腫瘤細(xì)胞中前病毒 DNA卻存在于所有細(xì)胞基因組的同一位點(diǎn)，說明它們是由ALV的 DNA插入基因組適當(dāng)位點(diǎn)的一個(gè)細(xì)胞所形成的克隆。 在這方面最典型的例子是禽白血細(xì)胞增多癥病毒（ AW）。這一單個(gè)堿基對(duì)的點(diǎn)突變，看來就是正常細(xì)胞癌基因變成活化癌基因的關(guān)鍵。從轉(zhuǎn)化細(xì)胞中已分離到活化癌基因的分子克隆，并證明其與 Harvey鼠肉瘤病毒的癌基因 （ vHaras）