【正文】 5. NF1基因 NF1（ neurofibromatosis type l）基因是多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤的易感基因，定位于第 17號染色體長臂（ ）。 NF1蛋白同 ras族癌基因編碼的 GTP酶活性蛋白有一定的同源性。 NF1失活足以產(chǎn)生良性的神經(jīng)纖維瘤，但在惡變時(shí)可能還有別的基因參與。 該蛋白含 4個(gè)鋅指紋族，顯示與特異性 DNA結(jié)合的特性，能同上皮細(xì)胞生長因子受體 EGFRl啟動子區(qū)域的 CGCCCCCGC序列結(jié)合，從而抑制其轉(zhuǎn)錄活性。 ? 在純合性缺失的 Wilms瘤中無 WT1 mRNA表達(dá)，但在絕大多數(shù) Wilms瘤中呈高表達(dá)。突變的基因可過度表達(dá)，并對野生型等位基因起抑制作用。用含 erb A和 erbB基因的禽成紅細(xì)胞增多癥病毒（ AEV）感染紅細(xì)胞系造血細(xì)胞，可產(chǎn)生紅白血病。 8. Krevl基因 日本學(xué)者野田亮等用插入到真核細(xì)胞表達(dá)性質(zhì)粒的人包皮成纖維細(xì)胞 cDNA文庫提取的總DNA，轉(zhuǎn)染經(jīng) Kras癌基因轉(zhuǎn)化的小鼠 NIH3T3細(xì)胞，從中篩選出扁平型表型逆轉(zhuǎn)的細(xì)胞克隆。有關(guān)這一基因的結(jié)構(gòu)與功能尚少報(bào)道，可能與人類腫瘤關(guān)系不大。 目前已知的 CKI可分為兩大類： ? INK4（ inhibitor of CDK4） —— 特異地抑制CyclinD1 CDK6的磷酸化激酶活性； ? Kip（ kinase inhibition protein） —— 抑制現(xiàn)己知的大多數(shù) Cyclin 現(xiàn)已知的 INK4包括 pl6 INK4a p15INK4b p18 INK4c p19INK4d 其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能具有高度相似性。 pl6 INK4a基因又稱多腫瘤抑制因子（ multiple tumor suppressor l,MTSI）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 4抑制因子（ cyclindependent kinase 4 inhibitor,CDK4I），是 Kamb和 Nobori在 1994年發(fā)現(xiàn)的。分子量為 16 kD的蛋白質(zhì)。 最近發(fā)現(xiàn)，小鼠 INKK4a基因組能產(chǎn)生 α 、β 兩種轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，兩者長度基本相同。 INK4a基因和 ARF基因分別具有不同的啟動子，產(chǎn)生不同的基因產(chǎn)物。 雖然 INK4a基因和 ARF基因共有外顯子 2和外顯子 3，但由于讀框互不相同，他們編碼的蛋白質(zhì)序列沒有同源性。 pl6 INK4a還可間接抑制包括 DNA合成在內(nèi)的多種生化反應(yīng)，從而抑制細(xì)胞周期進(jìn)程。 ? p19ARF ／ p53途徑： wtp53基因的表述受 mdm2癌基因產(chǎn)物 MDM2的負(fù)調(diào)控。 p19ARF 的 N端結(jié)構(gòu)域可以與 MDM2的 C端結(jié)構(gòu)域結(jié)合，阻止 MDM2進(jìn)入核內(nèi)并加速其降解，因而可以提高 wtp53的穩(wěn)定性和在細(xì)胞核中的水平 ,抑制腫瘤發(fā)生。 在多種腫瘤中均可發(fā)現(xiàn) pl6 INK4a基因的異常： ? 在胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、急性白血病、惡性黑色素瘤、鼻咽癌等人類腫瘤中的 pl6 INK4a純合性缺失 率較高 ? 在胰腺癌、食管鱗癌、家族性惡性黑色素瘤及膽管癌等腫瘤中則 pl6 INK4a的 突變 率較高 ? 在乳腺癌及胃癌中 pl6 INK4a的突變率較低 近年來發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌中 pl6 INK4a 5`CpG島的甲基化達(dá) 33％，在對大腸癌、前列腺癌、乳腺癌等原發(fā)腫瘤和細(xì)胞系的檢測中也發(fā)現(xiàn)了 pl6 INK4a 5` CpG島的高甲基化。 10． p21Cip1 基因 細(xì)胞周期抑制蛋白 CKI包括 INK4和 KiP 兩大類。 它們在 N末端的結(jié)構(gòu)和功能具有高度的相似性。他們均可特異地抑制下列蛋白激酶活性，具有同 INK4相似的功能： CyclinD1 CDK6 CyclinECDK2 1993年 Harper和 EIDeiry兩個(gè)試驗(yàn)小組同時(shí)分離出 p21基因的 cDNA。 p21基因定位于第 6號染色體短臂 （ ），其基因組 DNA長度為 85kb, 由 3個(gè)外顯子組成。 在 p21編碼區(qū)上游 24 kb和大于 8 kb處有 2個(gè) p53結(jié)合區(qū)， p21蛋白定位于細(xì)胞核中，由 164個(gè)氨基酸殘基組成，富含精氨酸。 p21是目前已知的具有最廣泛激酶抑制活性的細(xì)胞周期抑制蛋白。 CDK復(fù)合物結(jié)合，通過多種途徑對細(xì)胞周期演進(jìn)起抑制作用。 CDK4, CyclinE p21基因的活化和表達(dá)可通過以下兩個(gè)途徑來完成： ①依賴 P53途徑 ②非依賴 p53途徑 ① 依賴 p53途徑 當(dāng)細(xì)胞受到損傷時(shí)（如受 γ 輻射），在wtp53+/+ 細(xì)胞中常有 wtp53,p21表達(dá)升高，細(xì)胞停滯于 G1期，而在 p53 / 細(xì)胞中則無 p21升高，細(xì)胞也無 G1期停滯，說明 wtp53 作為轉(zhuǎn)錄因子，可啟動 p21表達(dá)，使細(xì)胞停滯于 GI期，以利于DNA修復(fù)，維持細(xì)胞遺傳信息的穩(wěn)定性。佛波酯、 γ 干擾素等可誘導(dǎo) wtp53 /的人類白血病細(xì)胞系的 p21表達(dá)，并出現(xiàn)單核巨噬細(xì)胞系分化相關(guān)的生長停滯。在黑色素瘤細(xì)胞間變痣、SV40轉(zhuǎn)化的黑色素瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移的黑色素瘤中，其表達(dá)水平依次顯著降低，表明 p21表達(dá)與黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。 11． p27Kip1 p27Kip1是 Polyak等于 1994年在 TGFβ 處理的生長抑制細(xì)胞，及接觸抑制的細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)的另一種分子量為 27 kD的耐熱細(xì)胞周期抑制蛋白。 CDK2， CyclinD1 CyclinE CDK2的激酶活性。其末端 21~87位點(diǎn)的 60個(gè)氨基酸殘基具有兩個(gè) Ser磷酸化位點(diǎn)，具 CDK激酶抑制活性。 p27Kip1的 C末端有一個(gè) Thr磷酸化位點(diǎn)，與其 H1組蛋白磷酸化抑制作用有關(guān)。在TGFβ 處理前后細(xì)胞內(nèi) p27Kip1的 mRNA總量無明顯變化，但在處理后 G1末期細(xì)胞中游離的p27Kip1濃度增加。 CDK4可以使滯留于 G1期的細(xì)胞重新分裂。 另外， p27Kip1具有抑制染色質(zhì) H1組蛋白 磷酸化的作用。 p27Kip1具有多種細(xì)胞周期抑制作用，雖其作用弱于 p21Cip1 ，但對正常組織的損傷明顯低于后者，因此有可能作為基因治療中可供選擇的靶基因。 由于該基因定位于第 3號染色體短臂（ ），該處存在脆性部位 FRA3B，而且．根據(jù)其推算的蛋白質(zhì)序列 與具有三價(jià)組氨酸結(jié)構(gòu)域的 HIT蛋白質(zhì)高度同源，因此定名為脆性組氨酸三聯(lián)體 （ fragile histidine triad, FHIT）。 關(guān)于 FHIT異常與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系已有許多研究報(bào)道，迄今尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān) FHI下基因突變的報(bào)道。 13. PTEN PTEN／ MMAC1/TEP1基因是 1997年由3個(gè)研究組分別發(fā)現(xiàn)和命名的一種抑癌基因。 ? PTEN —— phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 ? MMAC1—— mutated in multide advanced cancers ? TEP1 TGF β regulated and epithelial cell enriched phosphatase PTEN定位在 ，并已被克隆。 PTEN蛋白的主要結(jié)構(gòu)功能區(qū)位于 N端，由個(gè) 1209個(gè)核苷酸編碼 403個(gè)氨基酸殘基組成一條多肽鏈。 目前對 PTEN的作用機(jī)理已有較多報(bào)道，認(rèn)為 PTEN的抑癌作用可通過以下途徑來完成： ① FA K途徑 ②三磷酸脂酸肌醇激酶途徑 ③絲裂原激活的蛋白激動途徑 ① FA K途徑 錨著點(diǎn)激酶（ FAK）是整合素 (integrin)介導(dǎo)的信號途徑中的一個(gè)關(guān)鍵分子。 PTEN 則可直接使 FAK去磷酸化，從而抑制細(xì)胞生長。是胰島素生長因子（ IGF）和上皮生長因于（ EGF）等一些細(xì)胞生長因子在細(xì)胞內(nèi)的第二信使。后者隨后激活信號傳導(dǎo)系統(tǒng)中的一系列激酶包括絲蘇氨酸激酶（ Akt）。 PTEN能抑制 PI3激酶的磷酸化作用，阻止PIP2向 PIP3轉(zhuǎn)化從而阻斷了 Akt及其下游基因的活性，從而起到了抑癌作用。整合素可同生長因子協(xié)調(diào)作用，通過一系列復(fù)雜的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，刺激細(xì)胞增殖。 關(guān)于 PTEN與腫瘤之間的關(guān)系已有較多報(bào)道。 對 5個(gè)家系進(jìn)行的研究中，發(fā)現(xiàn)有 4個(gè)家系存在著 PTEN基因的生殖細(xì)胞突變。在其中兩個(gè)家系病人的錯(cuò)構(gòu)瘤中存在著 PTEN等位基因的 LOH。 其他惡性腫瘤如惡性膠質(zhì)瘤、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌及卵巢癌中，也發(fā)現(xiàn)了較高頻率的PTEN等位基因 LOH和突變，其中子宮內(nèi)膜癌的突變率可高達(dá) 50％。 Halm等報(bào)道， %（ 25／ 84）的胰腺癌有 DPC4基因的純合性缺失， ％（ 6／ 27）有基因突變，多發(fā)生于外顯子 8， 9， l0， 11。 這些基因都是 TGF β 超家族的成員。 DPC4基因缺失或突變可能導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖。 一旦這些基因由于缺失或突變而失活，則可使機(jī)體處于遺傳不穩(wěn)定（ geic instability）狀態(tài)，也有人稱之為突變者表型（ mutator phenotype）。 這種發(fā)病機(jī)理與上述抑癌基因基本相同，所以目前許多學(xué)者向于把它們看成抑癌基因。 1．錯(cuò)配修復(fù)基因 基因突變是腫瘤發(fā)生的主要原因，而引起基因突變的直接誘因則是不同類型的 DNA損傷。 大量研究表明，從細(xì)菌、酵母到人體細(xì)胞都存在著一種能修復(fù)堿基錯(cuò)配的安全保障體系，它們由一系列特異地修復(fù)堿基錯(cuò)配的酶分子組成，稱之為 DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng) ( DNA mismatch repair system,MMR），而編碼這些酶分子的基因則稱之為 錯(cuò)配修復(fù)（ MMR）基因 。 早在 70年代，人們就在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)了一種稱為 MutHLS途徑的 MMR系統(tǒng)。此外該途徑還需要 DNA聚合酶 Ⅲ 、 DNA連接酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白和外切核酸酶等的參與。 有報(bào)道酵母 MMR修復(fù)體系的三種 MMR基因中任何一種發(fā)生突變，都會使酵母基因組中二核昔酸重復(fù)序列拷貝數(shù)大大增加或降低。 人類 MMR基因的發(fā)現(xiàn)則經(jīng)歷了一個(gè)較為曲折的過程， 1993年世界上有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室同時(shí)報(bào)道，在約 12～ 18％的散發(fā)性結(jié)腸癌病人腫瘤細(xì)胞中檢測到一種“遍在性體細(xì)突變” (ubiquitous somatic mutation)。 遍在性體細(xì)胞突變 是指人體細(xì)胞基因組中普遍存在的，被稱為微衛(wèi)星的 DNA簡單重復(fù)序列拷貝數(shù)的變化，具體表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中某些特定的微衛(wèi)星序列長度上有差異。 隨后各國學(xué)者對這一現(xiàn)