細(xì)胞工程finalppt課件-文庫(kù)吧資料
2024-09-24 20:22本頁(yè)面
【正文】 的淋巴細(xì)胞同腫瘤細(xì)胞融合，成功建立了單克隆抗 體技術(shù)，而獲得 1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。 動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存 42 動(dòng)物細(xì)胞融合 1958年， Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺(tái)病毒可引起艾氏腹水瘤細(xì)胞彼此融合。 80℃ 過(guò)夜。 棄上清，加入預(yù)冷的凍存液，吹打均勻。 吹打成單個(gè)細(xì)胞。不易發(fā)現(xiàn)，對(duì)青霉素有抗藥性。 預(yù)防用藥一般用雙抗生素 (青霉素100u/mL加鏈霉素 100μg/ mL)， 污染后清除用藥需采用大于常用量 5～ 10倍的沖洗療法 ， 于加藥后作用 24～48小時(shí) ， 再換常規(guī)培養(yǎng)液 。 —— ② 不死性，接觸抑制，不致癌 從原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的原因？ 細(xì)胞會(huì)因 密度過(guò)大 和代謝消耗引起 營(yíng)養(yǎng) 枯竭，不能正常生長(zhǎng) 動(dòng)物原代細(xì)胞分離培養(yǎng)代 35 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對(duì)細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。 有限細(xì)胞系 無(wú)限細(xì)胞系 50代細(xì)胞 動(dòng)物原代細(xì)胞分離培養(yǎng)與傳代 34 動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。 1951年， Gey建立了人體宮頸癌 Hela細(xì)胞系。 32 1907年， Harrison 首先培養(yǎng)了蛙胚神經(jīng)管區(qū)細(xì)胞，并觀察到從中長(zhǎng)出的軸突細(xì)胞（神經(jīng)纖維），他的工作被認(rèn)為是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)開(kāi)始的標(biāo)志。 （不同種生物之間存在著生殖隔離，所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可能做到這一點(diǎn)的） 19 體細(xì)胞融合產(chǎn)生遠(yuǎn)緣雜交 植物體細(xì)胞雜交 20 植物體細(xì)胞雜交過(guò)程 植物細(xì)胞 A 植物細(xì)胞 B 去掉細(xì)胞壁 去掉細(xì)胞壁 原生質(zhì)體 A 原生質(zhì)體 B 原生質(zhì)體融合 雜合的原生質(zhì)體 再生出細(xì)胞壁 雜種細(xì)胞 細(xì)胞分裂 分化發(fā)育 愈傷組織 雜種植株 21 植物體細(xì)胞雜交過(guò)程 原生質(zhì)體制備 取材與除菌 ： 肥皂水 70%酒精 3%次氯酸鈉 —無(wú)菌水沖洗 —無(wú)菌濾紙吸干 酶解： 纖維素酶、果膠酶等 分離 ： 過(guò)濾、離心 洗滌 ： 去除酶等物質(zhì) 鑒定 ： 22 植物體細(xì)胞雜交過(guò)程 原生質(zhì)體制備 原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)） 化學(xué)誘導(dǎo)融合 ： 聚乙二醇結(jié)合高鈣高 pH 缺點(diǎn)：具有細(xì)胞毒性 物理法誘導(dǎo)融合： 離心、振動(dòng)、電刺激等 23 植物體細(xì)胞雜交過(guò)程 原生質(zhì)體制備 原生質(zhì)體融合（人工誘導(dǎo)） 雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)（形成愈傷組織） 雜合細(xì)胞再生出細(xì)胞壁后轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)劑，待長(zhǎng)出愈傷組織再按常規(guī)方法誘導(dǎo)其長(zhǎng)芽、生根、成苗。 ?細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，但利于次生代謝物的積累 。 ?固定化的細(xì)胞密集而緩慢的生長(zhǎng)，利于分化。 15 紅豆杉與紫杉醇 植物細(xì)胞培養(yǎng)及次生代謝物的生產(chǎn) 16 培養(yǎng)方式 懸浮培養(yǎng) ?適于大量快速增殖細(xì)胞，但不利于次生代謝物的積累。目前發(fā)現(xiàn)的植物天然代謝物已經(jīng)超過(guò) 2萬(wàn)種。 12 植物組織培養(yǎng)的過(guò)程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 脫分化（誘導(dǎo)去分化） 愈傷組織 （排列疏松而無(wú)規(guī)則，高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞） 再分化 細(xì)胞再分化 （ redifferentiation)： 脫分化后的分生細(xì)胞（愈傷組織）在特定的條件下，重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力， 形成芽 、根或胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育成完整植物體的過(guò)程。 8 9 植物組織培養(yǎng)的過(guò)程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 1. 選擇外植體，以幼嫩的組織或器官為宜 2. 除去病原菌及雜菌 自來(lái)水漂洗 —消毒 —無(wú)菌水沖洗 —吸干 3. 培養(yǎng)基制備 蔗糖和葡萄糖、氮、磷、鉀、鎂 微量元素，如鐵、錳、硼酸 微量有機(jī)物：吲哚乙酸、激動(dòng)素、肌醇 10 植物組織培養(yǎng)的過(guò)程 離體的植物器官、組織或細(xì)胞 脫分化（誘導(dǎo)去分化） 細(xì)胞脫分化 （ dedifferentiation) 是指失去已分化細(xì)胞的典型特征
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