dna-酶切、回收和連接-文庫吧資料
2024-08-17 17:39本頁面
【正文】 ： 10 內切酶緩沖液 2?l DNA ?g 限制性內切酶 25單位 用滅菌的 ddH2O補至 20?l， 37℃ 1小時。 ⑦ 置 65℃ 水浴中 10分鐘 ， 對限制性內切酶進行滅活 ， 不同的酶滅活條件可能不同 ， 請參照說明書進行 。 C 3. Diluent Compatibility: Diluent B 4. Heat Inactivation: 65176。 ③ 產生一個新的磷酸二酯鍵 ， 把缺口封起來 。 DNA連接酶的作分三步： ① T4DNA 連接酶與輔助因子 ATP形成酶 AMP復合物 。它能識別雙鏈 DNA分子中特定的靶序列 （ 4～8bp),并在該序列內切斷 DNA， 形成特有的粘末端或平端 。 由于限制性內切酶能識別 DNA特異序列并進行切割 ，因而在基因重組 、 DNA序列分析 、 基因組甲基化分析 、 基因物理圖譜繪制及分子克隆等技術中收到廣泛應用 。 DNA片段膠回收的方法 二 .實驗原理 類專一識別雙鏈 DNA中特定堿基序列的核酸水解酶 ， 它們的功能類似于高等動物的免疫系統(tǒng) ， 用于抗擊外來 DNA的侵襲 。 實驗七 基因片段的亞克隆 (DNA的酶切、回收和連接 ） 一 .實驗目的 DNA酶切的基本原理 。 使用方法 。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)幾百種限制性內切酶 ， 它們以內切方式水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵 ， 產生的 DNA片段 5’端為 P， 3’端為 OH。
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